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Rajesh Kumar Bhola 1, Shubham Rastogi 2, Christophe Fudaly 2, Sebastien Raimbault 2, Thomas Gibelin 2
1 Laboratório de Hematologia, Departamento de Patologia, Hospital IMS & SUM, Universidade Sikshya 'O' Anusandhan, Bhubaneswar, Índia
2 HORIBA Medical, Montpellier, França
A análise do hemograma completo é o ponto de partida fundamental para a triagem de saúde, o diagnóstico clínico, bem como o monitoramento de doenças e terapias. A contagem diferencial de leucócitos é um dos parâmetros mais importantes na quantificação de diferentes leucócitos, incluindo formas maduras e imaturas, detectando várias anormalidades morfológicas ou a presença de células atípicas inesperadas ou blastos. Em condições fisiológicas, essas populações estão ausentes do sangue periférico, exceto em recém-nascidos. Sua presença em quantidade significativa deve levar a investigações adicionais.
A contagem de granulócitos imaturos (CGI) é usada na avaliação de várias infecções ou sepse e sua gravidade 1,2, condições inflamatórias como pancreatite 3, apendicite 4, síndrome da angústia respiratória aguda (SARA) 5, diferentes doenças da medula óssea, enxerto de transplante ou terapia com fator de crescimento ou neoplasias hematopoiéticas.
Durante a contagem diferencial automatizada de leucócitos, os metamielócitos, mielócitos e promielócitos têm sido contados como granulócitos imaturos (IMG) por diversos analisadores hematológicos HORIBA enquanto os analisadores da Sysmex os reportam como granulócitos imaturos (IG). O presente estudo prospectivo foi realizado para comparar os parâmetros de IMG reportados pelo Yumizen H2500 com a contagem de IG do analisador Sysmex XN 3000.
A medição de IMG no Yumizen H2500 é baseada na citometria de fluxo do Sistema Sequencial Hidrodinâmico Duplo «DHSS». As células são detectadas, contadas e medidas usando uma combinação de impedância e extinção óptica (Figura 1).
Figura 1: Tecnologia de medição IMG
Os eventos são representados na matriz LMNE, onde o eixo X representa o volume e o eixo Y a extinção óptica, mostrando vários agrupamentos de células. Os granulócitos imaturos são discriminados pelo seu elevado volume e alta extinção óptica, denotando uma estrutura nuclear complexa e granulações (Fig. 2).
Figura 2: Contagem baixa de IMG (esquerda) versus contagem alta de IMG (direita) da matriz HORIBA Yumizen H2500 LMNE
No analisador Sysmex XN-3000, os granulócitos são medidos no canal de diferencial de leucócitos (WDF), onde as células são marcadas com um corante que se liga aos ácidos nucleicos (Fluorocell WDF) e, em seguida, passam pelo feixe de um laser semicondutor. A alta dispersão lateral é medida para granulócitos, e a fluorescência é maior para células imaturas que possuem mais RNA residual.
Figura 3: IG baixo (esquerda) vs. IG alto (direita) da matriz WDF do Sysmex XN-3000
Um total de 107 amostras de sangue periférico anticoaguladas com EDTA foram selecionadas aleatoriamente de pools diários de amostras, independentemente da idade, sexo ou condição clínica, apresentando ampla variação na contagem de granulócitos imaturos. Todas as amostras foram processadas em duplicata nos analisadores hematológicos Yumizen H2500 (HORIBA Medical, França) e XN-3000 (Sysmex, Japão) em até 4 horas após flebotomia utilizando ambos os analisadores em paralelo para a determinação de granulócitos imaturos. Um esfregaço de sangue periférico foi preparado para cada amostra e examinado microscopicamente por meio de 200 contagens diferenciais. A revisão manual das lâminas foi realizada seguindo as diretrizes CLSI H20-A2. Após a exclusão de outliers, 98 amostras foram analisadas estatisticamente. Os valores de IMG (disponíveis no Yumizen H2500), IG (disponíveis no XN-3000) e a porcentagem de IG obtidos pela revisão manual das lâminas foram correlacionados com o software Analyze-It v6.01.1.
A contagem de granulócitos imaturos variou entre 0 e 3,7 G/L pelo analisador XN, enquanto que pelo YH2500 variou entre 0 e 2,41 G/L. A análise de regressão de Passing-Bablok para IG# mostrou uma correlação muito boa, R=0,96 e R²=0,92, inclinação de 0,94 (IC 95%: 0,838-1,0) e offset de 0,011 (IC 95%: 0,010-0,002).
Figura 4: Correlação e gráfico da diferença YH2500 vs XN3000 IG# (contagens absolutas)
A contagem de granulócitos imaturos por 100 leucócitos variou entre 0,1 e 11,2% pelo analisador XN, enquanto que pelo YH2500 variou entre 0,2 e 12%. A análise de regressão de Passing-Bablock para a porcentagem de granulócitos imaturos mostrou uma correlação muito boa (R=0,91, R²=0,83), inclinação de 0,877 (IC 95% 0,706 - 1) e deslocamento de 0,218 (IC 95% 0,126 - 0,30).
Figura 5: Correlação e gráfico da diferença YH2500 vs XN3000 IG% (contagens por 100 leucócitos)
A microscopia manual também apresentou boa concordância com YH2500 (R=0,90, R²=0,80), inclinação de 0,888 (IC 95% 0,733 – 1,2) e deslocamento de 0,45 (IC 95% 0,35 – 0,50).
Figura 6: Correlação e gráfico da diferença entre a porcentagem de IMG YH2500 e a contagem por 100 leucócitos obtida por revisão manual de lâminas.
A contagem de IMG realizada pelo Yumizen H2500 apresentou boa correlação e concordância com a contagem de IG realizada pelo Sysmex XN-3000, o que indica que os resultados de IMG de ambos os instrumentos são intercambiáveis. Yumizen H2500 também apresentou boa correlação com a contagem manual.
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