Validação de desempenho dos contadores de células sanguíneas HORIBA Medical Yumizen H2500 e H1500, componentes da solução HORIBA Evolutive Laboratory Organization (HELO), em comparação com o Sysmex XN-10.

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¹ Cécile Chabert, ¹ Elise Darrambide, ¹ Jean-Remy Gougaud, ² Franck Seguy, ³ Bruce H Davis ¹ Qualidade Clínica, ² Marketing Internacional e ³ Assuntos Científicos e Médicos, HORIBA Medical, Montpellier, França

Resumo

Introdução: HORIBA Medical lançou um novo sistema de automação laboratorial para testes hematológicos, o sistema HORIBA Evolutive Laboratory Organisation (HELO), que inclui um novo contador de células sanguíneas de alto rendimento que oferece parâmetros de hemograma completo, incluindo contagens de rotina de hemácias nucleadas, análise de reticulócitos por fluorescência e contagens de plaquetas por extinção óptica, além de contagem de fluidos corporais. Estudos iniciais de validação foram realizados para confirmar as especificações de desempenho em relação à precisão, limite de quantificação (LOQ), linearidade, exatidão e comparações de métodos com outros modelos de contadores de células sanguíneas e contagens diferenciais microscópicas de leucócitos, cujos resultados são apresentados neste artigo.

Métodos: Mais de 1200 amostras de sangue fresco coletadas em EDTA K2 ou K3 de pacientes e controles saudáveis foram analisadas em instrumentos Yumizen H1500 e H2500 com estações de trabalho P8000 para comparação do método com os instrumentos Pentra DX Nexus, Siemens Advia 2120, Sysmex XE-2100, Beckman Coulter DXH800 e Sysmex XN-10. A comparação do método e a estimativa do viés foram realizadas de acordo com o CLSI EP09-A3. A análise estatística foi realizada utilizando o ajuste de regressão de Passing-Bablok com o coeficiente de correlação de Pearson (r) e os gráficos de diferença de Bland-Altman. A precisão, a linearidade e o limite de detecção foram determinados de acordo com as diretrizes do CLSI e do ICSH.

Resultados: A precisão nas faixas baixa, normal e alta de todos os parâmetros foi determinada como estando abaixo das especificações para o CV, incluindo leucócitos <2%, eritrócitos <2%, hemoglobina <1%, hematócrito <2%, plaquetas <5% (<10% abaixo de 30 x 10^9/L), comparável aos instrumentos Advia e Sysmex. Linearidade foi confirmada para contagens de plaquetas entre <10 e 5000 x 10^9/L, para contagens de eritrócitos de 0,22 a 8,95 x 10^12/L, para hemoglobina de 0,6 a 24,5 G/L, para hematócrito de 1,8 a 69,7%, para leucócitos de 0,3 a 406 x 10^9/L e para reticulócitos de 0,043 a 1,244 x 10^9/L (modelo H2500). A correlação dos modelos Yumizen H1500 e H2500 com os modelos Advia 2120 e Sysmex XE-2100 e XN-10 excedeu as especificações de fabricação, com um r² > 0,90 para os parâmetros de leucócitos (WBC), eritrócitos (RBC), hemoglobina (HBG), hematócrito (HCT), volume corpuscular médio (MCV), contagem de plaquetas (PLT) e reticulócitos (H2500) para amostras que abrangem toda a faixa de medição analítica. As contagens de plaquetas pelos métodos de impedância e extinção óptica também apresentaram correlação em níveis de r² > 0,95.

Conclusões: Os instrumentos Yumizen H1500 e H2500 são tão seguros e eficazes quanto a maioria dos instrumentos do segmento de mercado de contadores de células sanguíneas de alta gama, apresentando desempenho igual ou superior. A nova contagem de plaquetas por extinção óptica apresenta desempenho igual ou superior à contagem por impedância. Estudos de validação semelhantes estão em andamento para outros parâmetros de diagnóstico in vitro (IVD) dos instrumentos YH1500 e YH2500.

Fundo

HORIBA Medical lançou o sistema HORIBA Evolution Laboratory Organisation (HELO), que oferece automação completa para laboratórios de hematologia. Os contadores de sangue de alto rendimento desta linha de produtos são o Yumizen H1500 e o H2500, com capacidade para 120 amostras por hora. O instrumento Yumizen H1500 realiza hemograma completo com diferencial completo, incluindo eritrócitos nucleados (nRBCs) e fluidos corporais. O instrumento Yumizen H2500, além de realizar hemograma completo com diferencial completo, incluindo nRBCs e fluidos corporais, oferece também análise de reticulócitos por fluorescência (laranja de tiazol) e contagem de plaquetas por extinção óptica. Ambos os instrumentos podem operar com a estação de trabalho P8000 como equipamentos independentes ou integrados à linha de automação HELO. O Yumizen H2500 pode ser integrado a um corador automático de lâminas, o instrumento SPS. Um estudo completo de validação de desempenho foi realizado utilizando múltiplos instrumentos em três locais de teste (Montpellier, Nîmes e Marselha), o que permitiu estudos de comparação de métodos envolvendo os instrumentos HORIBA Pentra DX Nexus, Advia 2120, Sysmex XE2100, Sysmex XN 3000 e Beckman Coulter DXH800. Este relatório preliminar resume o desempenho desses contadores de sangue a partir de dados submetidos para o processo de marcação CE da UE, que foi bem-sucedido. Atualmente, os instrumentos não possuem aprovação da FDA dos EUA.

Métodos

Mais de 1.200 amostras de pacientes, bem como material de controle e kits de linearidade para plaquetas, hemácias, hematócrito e hemoglobina (R&D Systems, Minneapolis, MN, EUA), foram selecionadas para abranger toda a faixa de medição analítica (AMR), limites de quantificação (LOQ), limites de detecção (LOD), limites de branco (LOB) e precisões (reprodutibilidade e repetibilidade) em vários níveis para os parâmetros medidos.

A comparação de métodos, a precisão, o efeito de arraste, os testes de interferência e a estimativa de viés foram realizados de acordo com as normas CLSI EP5-A2, CLSI EP09-A3, H44-A2 e H26-A2. As contagens sanguíneas manuais para fins de arbitragem foram realizadas de acordo com a norma CLSI H20-A2. A análise estatística incluiu o uso da análise de regressão de Passing-Bablok e da análise de Bland-Altman para diferenças entre métodos e análise de viés.

Resultados

Figura 1: Matriz de leucócitos (painel esquerdo) para a contagem diferencial de células nos analisadores Yumizen H1500 e Yumizen H2500, exibindo as populações de eritroblastos nucleados (NRBC) (A), linfócitos (B), linfócitos “atípicos” (C), monócitos (D), neutrófilos (E), incluindo neutrófilos com desvio à esquerda (F), eosinófilos (G), linfócitos imaturos (H), monócitos imaturos (J), incluindo monócitos com desvio à esquerda (I), e células mieloides imaturas (K). A matriz obtida no modo de extinção óptica de plaquetas (painel direito) plota a extinção óptica (eixo y) versus a impedância (eixo x) e permite uma melhor separação de plaquetas (caixa amarela, canto inferior esquerdo) e aglomerados de hemácias (vermelho).

Tabela 1: Linearidade e limite de quantificação (LOQ) determinados para Yumizen H1500 (excluindo parâmetros de PLT-ox e reticulócitos) e Yumizen H2500

Tabela 2: Desempenho da imprecisão total (CV de viés + reprodutibilidade) do Yumizen H2500 em comparação com a geração anterior Pentra DX Nexus, com base na análise de 5 amostras de sangue controle, analisadas em duplicata duas vezes ao dia, durante pelo menos 20 dias, em cada um dos níveis baixo, normal e alto. As amostras foram analisadas no modo DIFF padrão e no novo modo de contagem estendida para hemácias e plaquetas por extinção óptica (PLTox). A especificação de desempenho original foi superada em todos os parâmetros e, em todos os parâmetros, exceto VPM e linfócitos altos, o desempenho do Yumizen H2500 foi igual ou superior ao do Pentra DX Nexus.

Figura 2: A avaliação do método de contagem de plaquetas por extinção óptica (PLTox) versus a contagem por impedância (PLTi) no Yumizen H2500 mostra boa correlação e nenhum viés significativo (esquerda), também em comparação com o método de plaquetas fluorescentes no Sysmex XN3000 (PLT-F, direita).

Tabela 2: Desempenho da imprecisão total (viés + CV de reprodutibilidade) do Yumizen H2500 em comparação com a geração anterior Pentra DX Nexus, com base na análise de 5 amostras de sangue controle, analisadas em duplicata duas vezes ao dia, durante pelo menos 20 dias, em cada um dos níveis baixo, normal e alto. As amostras foram analisadas no modo DIFF padrão e no novo modo de contagem estendida para hemácias e plaquetas por extinção óptica (PLTox).

As especificações de desempenho originais foram superadas em todos os parâmetros e, em todos os parâmetros, exceto no VPM (Volume Plaquetário Médio) e na contagem de linfócitos, o desempenho do Yumizen H2500 igualou ou superou o do Pentra DX Nexus.

Tabela 3: Resumo das correlações entre métodos usando regressão de Passing-Bablok do Yumizen H2500 em comparação com o XN-3000 e todos os outros instrumentos, coletadas nos três locais e usando mais de 1200 amostras clínicas que abrangem a faixa de medição analítica para cada mensurando ou parâmetro.

Figura 3: As correlações intermétodo usando a regressão de Passing-Bablok do Yumizen H2500 (eixo Y) comparado ao Sysmex XN3000 (eixo X) para contagem de plaquetas (PLT); porcentagem de reticulócitos (RET%), hematócrito (HCT), contagem de glóbulos brancos (WBC), contagem de glóbulos vermelhos (RBC) e hemoglobina (HGB) mostram desempenho comparável dos instrumentos.

Conclusões

O desempenho dos analisadores Yumizen H1500 e Yumizen H2500 foi considerado equivalente e superou as especificações para todos os critérios de desempenho definidos antes do desenvolvimento. Observaram-se excelentes correlações entre todos os modos de operação (rack vs STAT, CBC+DIFF, CBC+Retic, contagem de valores baixos ou prolongada).
O desempenho geral do hemograma completo e da contagem de reticulócitos dos analisadores Yumizen H1500 e Yumizen H2500 foi considerado equivalente ou superior ao do Sysmex XN3000.
O novo método de extinção óptica para contagem de plaquetas apresentou desempenho comparável aos métodos de impedância padrão e ao método de contagem de plaquetas por fluorescência do Sysmex XN3000.
A utilidade dos novos valores de Mic% e Mac% em eritrócitos ainda precisa ser totalmente compreendida por estudos futuros.