Validação de desempenho do contador de células sanguíneas HORIBA Medical Yumizen H2500, componente analítico da solução HORIBA Evolutive Laboratory Organisation (HELO), em comparação com o DXH 800.

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Yumizen H2500 com Yumizen SPS e Yumizen P8000

Gilles Bonicelli ¹, Philippe Halfon ¹, Cécile Chabert ², Elise Darrambide ², Jean-Remy Gougaud ², Franck Seguy ³, Bruce H Davis ³
¹ Laboratório Alphabio, Marselha, França, ² Departamento de Qualidade Clínica e ² Marketing Internacional, HORIBA Medical, Montpellier, França e ³ Bruce H Davis MD, Inc, Clifton, Maine, EUA5

Introdução

HORIBA Medical lançou um novo sistema de automação laboratorial para testes hematológicos, o sistema HORIBA Evolutive Laboratory Organization (HELO), que inclui um novo contador de células sanguíneas de alto rendimento que oferece parâmetros de hemograma completo/diferencial, incluindo contagens rotineiras de hemácias nucleadas, análise de reticulócitos por fluorescência e contagem de plaquetas por extinção óptica, além de contagem de fluidos corporais. Estudos iniciais de validação foram realizados para confirmar as especificações de desempenho em relação à precisão, limite de quantificação (LOQ), linearidade, exatidão e comparações de métodos com outros modelos de contadores de células sanguíneas e contagens diferenciais microscópicas de leucócitos, cujos resultados são apresentados neste artigo. A matriz de diferenciação celular é baseada no sistema patenteado de citometria de fluxo HORIBA Double Hydrodynamic Sequential System "DHSS". Ao longo da avaliação de desempenho, coletamos um grande número de casos clínicos que foram objeto de um estudo dedicado.

Métodos

Foram analisadas 273 amostras de sangue fresco coletadas em EDTA K2 ou K3 de pacientes e controles saudáveis em um instrumento Yumizen H2500 com middleware Yumizen P8000 para comparação do método com o instrumento Beckman Coulter DXH800. A comparação do método e a estimativa de viés foram realizadas de acordo com o CLSI EP09-A3. A análise estatística foi realizada utilizando regressão de Passing-Bablok com gráficos de diferença de Pearson e Bland-Altman. A precisão, a linearidade e o limite de detecção foram determinados de acordo com as diretrizes do CLSI e do ICSH.

Resultados

A precisão nas faixas baixa, normal e alta de todos os parâmetros foi determinada como estando abaixo das especificações de fabricação para o CV, incluindo leucócitos <2%, eritrócitos <2%, hemoglobina <1%, hematócrito <2% e plaquetas <5% (<10% abaixo de 30 x 10^9/L). Linearidade foi confirmada para contagens de plaquetas entre <10 e 5000 x 10^9/L, para contagens de eritrócitos entre 0,22 e 8,95 x 10^12/L, para hemoglobina entre 0,6 e 24,5 G/L, para hematócrito entre 1,8 e 69,7%, para leucócitos entre 0,3 e 406 x 10^9/L e para reticulócitos entre 0,043 e 1,244 x 10^9/L. A correlação entre os modelos DXH-8000 e Yumizen H2500 ultrapassou 0,98 para os parâmetros de contagem de leucócitos (WBC), hemoglobina (HBG), hematócrito (HCT) e plaquetas (PLT), e ultrapassou 0,90 para volume plaquetário médio (MPV), eritrócitos (RBC) e reticulócitos, com amostras abrangendo toda a faixa de medição analítica. As contagens de plaquetas pelos métodos de impedância e extinção óptica também apresentaram correlação superior a 0,95.

Conclusões

O instrumento Yumizen H2500 é seguro, tão eficaz quanto o BCI DXH-800 e apresenta desempenho igual ou superior para todos os parâmetros usuais de hemograma completo/diferencial. A nova contagem de plaquetas por extinção óptica apresenta desempenho igual ou superior à contagem por impedância. Os recursos ergométricos do instrumento foram identificados pelos usuários menos experientes como as funções e configurações de sinalizadores personalizadas, projetadas para serem realizadas no módulo middleware Yumizen P8000. A validação analítica de fluidos corporais deverá ser avaliada em uma série estatística maior (Figura 6).

Tabela 1: Valores residuais das amostras determinados para Yumizen H2500

Tabela 2: Linearidade e limites de quantificação (LOQ) determinados para Yumizen H2500

Figura 6: Contagem de fluidos corporais, análise de 123 amostras diversas de fluidos serosos, líquor e sinoviais.

Imagem 1: Tela de resultados do middleware Yumizen P8000 dedicado à solução HELO

Estudo de casos clínicos:

O objetivo é auxiliar todos os usuários a se familiarizarem rapidamente com a visualização de dados dos citômetros Yumizen H1500 e Yumizen H2500, tanto para cientistas de laboratório quanto para médicos. A chave para o uso ideal de qualquer citômetro ou contador de células sanguíneas reside na utilização precisa dos detalhes fornecidos pela análise cuidadosa dos histogramas e das matrizes de dados.

A matriz de células brancas (painel esquerdo) para a contagem diferencial de células para Yumizen H1500 e Yumizen H2500 exibe as populações de NRBC (A), linfócitos (B), linfócitos “atípicos” (C), monócitos (D), neutrófilos (E), incluindo neutrófilos com desvio à esquerda (F), eosinófilos (G), linfócitos imaturos (H), monócitos imaturos (J), incluindo monócitos com desvio à esquerda (I) e células mieloides imaturas (K).

Um limiar de 2% ALY no Yumizen H2500 proporciona 92% de correlação com a sensibilidade relativa do DXH em 93% e a especificidade relativa em 73%.

Interferência entre hemácias e plaquetas

No histograma de plaquetas, não observamos nenhum vale na área das macroplaquetas. O VPM (Volume Plaquetário Médio) está artificialmente aumentado pela interferência dos eritrócitos.
No histograma RBC/PLT, observamos o vale entre as duas populações e a posição inadequada do limiar de impedância. O valor de impedância das plaquetas é rejeitado e um cálculo automático de PLTOx é mais preciso.
No histograma de hemácias, observamos a presença de uma população microcítica. Associada à baixa resposta reticulocitária, a anemia microcítica hipoproliferativa é típica do hipotireoidismo.
No diagrama de dispersão PLTo, observamos a separação entre a população de plaquetas e a população de hemácias no eixo óptico. O valor de PLTOx está correto.

Leucemia mieloide aguda M5

No gráfico de dispersão DIFF, observamos a presença de uma população monocítica imatura. Essa população é essencialmente composta por monócitos em todos os estágios de maturação, desde monoblastos e promonócitos até monócitos propriamente ditos. A população monoide está perfeitamente definida no gráfico de dispersão DIFF na área específica. Observamos também neutropenia grave. No histograma de leucócitos, observamos uma proporção significativa de monócitos em relação aos linfócitos ou células granulares.

Microscopic_view2_-_Acute_Myeloid_Leukemia_M5

No gráfico de dispersão DIFF, observamos a presença de linfócitos atípicos e células linfocíticas imaturas da LLC (leucemia linfocítica crônica).
No histograma de leucócitos, observamos que a proporção da população de linfócitos é maior que a da população de granulócitos.
No histograma de distribuição de linfócitos, observamos células grandes à direita da população de linfócitos, que correspondem às células grandes da LLC. Resultados com células borradas incluídas na população de linfócitos: NEU% 1,1%, LYM% 98,7%, MON% 0,2%.