Absorbância

A espectrofotometria é um método para medir a quantidade de luz absorvida por uma substância, medindo a intensidade da luz emitida por um feixe luminoso ao atravessar uma amostra da solução. O princípio básico é que cada composto absorve ou transmite luz em uma determinada faixa de comprimentos de onda. Essa medição também pode ser usada para quantificar uma substância química conhecida. A espectrofotometria é um dos métodos mais úteis para análise quantitativa em diversas áreas, como química, física, bioquímica, engenharia de materiais e química, e aplicações clínicas. É amplamente utilizada para análises quantitativas em várias áreas (por exemplo, química, física, biologia, bioquímica, engenharia de materiais e química, aplicações clínicas, aplicações industriais, etc.).
Um espectrofotômetro é um instrumento que mede a quantidade de fótons (a intensidade da luz) absorvidos após atravessarem uma solução amostral. Um espectrofotômetro, em geral, consiste em dois dispositivos: um espectrômetro e um fotômetro. O espectrômetro é um dispositivo que produz, tipicamente dispersa e mede a luz. O fotômetro é o detector fotoelétrico que mede a intensidade da luz. Com o espectrofotômetro, a quantidade de uma substância química conhecida (concentração) também pode ser determinada medindo-se a intensidade da luz detectada.
Dependendo da faixa de comprimento de onda da fonte de luz, pode ser classificado em dois tipos diferentes.
Espectrofotômetro UV-Visível: utiliza luz na faixa ultravioleta (185 - 400 nm) e na faixa visível (400 - 700 nm) do espectro de radiação eletromagnética.
Espectrofotômetro de infravermelho: utiliza luz na faixa do infravermelho (700 - 15000 nm) do espectro da radiação eletromagnética.
Na espectrofotometria visível, a absorção ou a transmissão de uma determinada substância pode ser determinada pela cor observada. Por exemplo, uma amostra de solução que absorve luz em toda a faixa visível (ou seja, não transmite nenhum comprimento de onda visível) aparece, em teoria, preta. Por outro lado, se todos os comprimentos de onda visíveis forem transmitidos (ou seja, não houver absorção), a amostra de solução aparece branca. Se uma amostra de solução absorve luz vermelha (~700 nm), ela aparece verde, pois o verde é a cor complementar do vermelho. Na prática, os espectrofotômetros visíveis utilizam um prisma para restringir uma determinada faixa de comprimentos de onda (filtrando outros comprimentos de onda), de modo que o feixe de luz específico passe através da amostra de solução.
A Lei de Beer-Lambert (também conhecida como Lei de Beer) afirma que existe uma relação linear entre a absorbância e a concentração de uma amostra. Por essa razão, a Lei de Beer só pode ser aplicada quando existe uma relação linear.