Avaliação do painel de anticorpos antifosfolipídicos para lúpus testado no Yumizen G1500 (HORIBA)

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K. Hickey e S. Kitchen, Centro de Hemofilia e Trombose de Sheffield, Sheffield, Reino Unido

Introdução

A classificação laboratorial do anticoagulante lúpico (AL) é feita por meio do prolongamento dos testes de coagulação dependentes de fosfolipídios. As diretrizes atuais recomendam o uso de dois ensaios de triagem. O primeiro teste deve ser o tempo de veneno de víbora de Russell diluído (dRVVT) e o segundo deve ser um APTT sensível ao AL ^1,2. A interferência do anticoagulante α-doador vivo (Xa-DOAC) no dRVVT é um problema crescente. Diferentes reagentes apresentam sensibilidade variável ao Xa-DOAC, com risco de resultados falso-positivos ou falso-negativos dependendo do reagente ³.

Objetivo

Avaliar o desempenho dos testes de triagem de LA realizados no Yumizen G1500 (HORIBA, França) em comparação com os testes de triagem de LA realizados no Sysmex CN6000 (Sysmex, Reino Unido).

APTT -Yumizen G APTT e Yumizen G APTT Liq (HORIBA, França) DRVVT - DVVtest e DVVconfirm (BioMedica Diagnostics, Canadá)
APTT - Actin FS e Actin FSL (Siemens, Reino Unido)
DRVVT - LA1 e LA2 (Siemens, Reino Unido)
Avaliar o teste DVV e confirmar a sensibilidade do reagente DVV ao XA-DOAC

Métodos

Foram selecionadas amostras anonimizadas previamente investigadas para LA.
As amostras foram classificadas com base nos resultados históricos de LA1/LA2.
Amostras previamente triadas para inibidores diretos/indiretos do fator Xa por meio de ensaio anti-Xa (LMWH) durante os testes iniciais.
Intervalo de referência (IR) Siemens LA1 e LA2 calculado usando o percentil 99 ^1,2 e resultados normalizados com plasma normal agrupado
LA negativo (n=48) (proporção <1,20) e LA positivo (n=41) (proporção >1,20)
O RI local (+/-2DP) 4 foi estabelecido para os 4 reagentes APTT e DVVtest/DVVconfirm. A média do RI foi usada para normalizar DVVtest/DVVconfirm ⁴.

Aumento de Xa-DOAC

O plasma normal agrupado foi adicionado com concentrações crescentes de rivaroxabana, apixabana e edoxabana.
A concentração de Xa-DOAC foi determinada utilizando Biophen Heparin LRT (Hyphen Biomed, Reino Unido) no Sysmex CN6000 (Sysmex Reino Unido).
Os testes DVVtest e DVVconfirm foram realizados em cada concentração e a taxa de confirmação de triagem normalizada (NSCR) foi calculada.

Resultados

Os testes Yumizen G APTT, Yumizen G APTT Liq e DVVtest/DVVconfirm demonstraram boa repetibilidade/reprodutibilidade tanto em amostras normais (CV <2,5% e <8,9%) quanto em amostras anormais (CV <5,2% e <11,1%) (ver Tabela 1).

Grupo LA Negativo: O teste DVV/DVVconfirm identificou 46/48 amostras como LA negativas (razão <1,27). Duas amostras apresentaram NSCR anormal (1,41 e 1,47). Observou-se prolongamento do APTT nos ensaios Yumizen G APTT (n=12), Yumizen G APTT Liq (n=10), Actin FS (n=6) e Actin FSL (n=10).

Grupo LA Positivo: O teste DVV/DVVconfirm identificou 25/41 amostras como positivas para LA (razão >1,27). O prolongamento do APTT foi observado em Yumizen G APTT (n=24), Yumizen G APTT Liq (n=18), Actin FS (n=5) e Actin FSL (n=21).

O teste DVV/confirmação DVV mostrou sensibilidade diferente ao Xa-DOAC. Para todos os casos de adição de Xa-DOAC, o NSCR permaneceu abaixo do limite de positividade à medida que a concentração aumentava (Figura 1).

Teste	Tipo de amostra	Repetibilidade			Reprodutibilidade
Teste	Tipo de amostra	n	Média (seg)	CV (%)	n	Média (seg)	CV (%)
APTT	Normal	10	33.1	1.7	20	37.3	8.9
APTT	Anormal	10	64.3	2.4	17	71.3	9.9
APTT Líquido	Normal	10	29.9	2.5	23	35	7.2
APTT Líquido	Anormal	10	66.6	3.7	19	67	11.1
Teste DVV	Normal	10	37.3	1.1	21	39.1	8.1
Teste DVV	Anormal	10	60.1	1.2	22	81.1	9.1
DVVconfirm	Normal	10	28.2	2.2	20	32.5	8.5
DVVconfirm	Anormal	10	32.7	5.2	19	37.9	9.6

Tabela 1. Características de desempenho do Yumizen G APTT, Yumizen G APTT Liq, DVVtest e DVVconfirm.

Figura 1: Curvas dose-resposta para DRVVT versus concentração de Xa-DOAC. Curvas dose-resposta da razão DVVteste normalizada, razão DVVconfirmação normalizada e razão triagem/confirmação normalizada (NSCR).

Conclusões

Yumizen G APTT, Yumizen G APTT Liq e DVVtest/DVVconfirm são reagentes confiáveis e fáceis de usar.
Observou-se boa concordância nas amostras negativas para LA e discordância nas amostras positivas para LA. Dada a natureza heterogênea dos anticorpos anti-LA, esse achado não é inesperado ao comparar reagentes dRVVT, visto que nenhum teste isolado consegue detectar todos os tipos de LA.
Os testes DVVtest e DVVconfirm NSCR podem potencialmente gerar resultados falso-negativos em pacientes em uso de DOACs do tipo Xa.
A interferência dos DOACs pode ser atenuada através do uso de carvão ativado após verificação local. ^1,2

Referências

Arachchillage DJ et al. Diretrizes sobre a investigação e tratamento da síndrome antifosfolipídica. Br J Haematol. 2024;205(3):855-80.
Devreese KMJ et al. Uma atualização sobre a detecção laboratorial e interpretação de anticorpos antifosfolipídicos para o diagnóstico da síndrome antifosfolipídica. J Thromb Haemost. 2025;23(2):731-44.
Hillarp A et al. Revelando os efeitos complexos dos anticoagulantes orais diretos nos ensaios de tempo de veneno de víbora de Russell diluídos. J Thromb Haemost. 2020;18(8):1866-73.
Instituto de Padrões Clínicos e Laboratoriais. Testes laboratoriais para o anticoagulante lúpico; diretriz aprovada. Wayne (PA): CLSI; 2014.

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