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Dr. Parag Dharap 1, Shubham Rastogi 2, Aaruni Agarwal 2, Sébastien Raimbault 3, Manuela Pastore 3, Esther Tournier 3
1 Centro de Diagnóstico Dr. Dharap, Mumbai, 2 HORIBA Medical India, Nova Délhi, 3 HORIBA Medical Montpellier, França
Com a chegada das monções, todos os hospitais públicos e laboratórios clínicos privados na Índia começam a receber uma grande quantidade de solicitações de exames para febre de origem desconhecida, especialmente para malária. Devido ao alto volume de trabalho, há necessidade de desenvolver metodologias para triagem e filtragem eficazes dessas amostras, auxiliando assim o microscopista. A maioria desses centros está equipada com analisadores hematológicos de três partes com diferencial. Gostaríamos de apresentar nossa experiência na detecção de malária em um laboratório clínico privado, onde um grande número de solicitações hemograma completo é recebido, especificamente para investigação de malária ou como parte do perfil para febre de origem desconhecida.
Nosso estudo foi conduzido para avaliar se as sinalizações geradas nos histogramas de leucócitos em contadores hematológicos diferenciais de três partes podem auxiliar como uma importante ferramenta diagnóstica adjuvante para o rastreio da malária. O índice parasitário foi determinado e sua correlação com as anormalidades encontradas no analisador hematológico também foi estudada.
Amostras de sangue foram coletadas de pacientes que apresentaram solicitações de investigação específica para malária ou doença febril aguda durante julho de 2014 e novembro de 2014.
Todas as amostras que apresentaram resultado positivo para malária em esfregaço de sangue periférico corado pelo método de Field foram posteriormente analisadas e classificadas quanto ao índice parasitário, tipo e espécie de parasitas da malária por 2000 hemácias. Essas amostras de sangue positivas para malária foram então processadas no analisador hematológico HORIBA Microsemi CRP, um contador diferencial de três partes de células sanguíneas, em até 6 horas após a coleta de sangue.
Dos 242 pacientes diagnosticados com malária em esfregaços sanguíneos corados em Field, 91 apresentaram sinalização L1 no histograma de leucócitos. Um pico nítido e distinto (↘) foi observado entre 30 e 100 fl, localizado na porção ascendente do pico de pequenas células (pico de linfócitos). Outros parâmetros anormais comuns encontrados foram VCM elevado e trombocitopenia.
Em um contador diferencial de células sanguíneas de três partes, a quantificação de leucócitos é realizada pelo método de impedância com o auxílio da diluição do sangue total por um diluente e um lisador. Além da lise das hemácias, a ação do lisador causa a remoção da membrana citoplasmática dos leucócitos, como ocorre com os linfócitos, ou o extravasamento do citoplasma, resultando no colapso da membrana ao redor do núcleo e dos grânulos citoplasmáticos, se presentes. Quando as células passam pela abertura, o pulso resultante é proporcional ao volume da célula. Esses dados gerados são então convertidos e segregados em regiões de pequeno volume celular, permitindo a classificação dos leucócitos: (30 a 100 fl) ocupada por linfócitos, região intermediária (100 a 150 fl) ocupada por monócitos e linfócitos ativados e região de grande volume (150 a 400 fl) ocupada por granulócitos. Após a lise das hemácias, as formas parasitárias intracelulares expostas do malária, resistentes à ação lítica, geram pequenos pulsos ao passarem pela abertura. Esses pulsos, por serem menores que a média dos linfócitos, são então representados como um pico separado na região de células pequenas. Outros elementos, como agregados plaquetários e hemácias nucleadas, também podem ativar esse sinal, cuja presença ou ausência pode ser determinada por meio do exame do esfregaço de sangue periférico.
Acreditamos que, no futuro, com maior sensibilidade, caracterização de dados e uso do lisador diferencial em um analisador hematológico diferencial de três partes, haverá a possibilidade de um indicador de suspeita de malária, que poderá ser usado como uma importante ferramenta diagnóstica auxiliar pela equipe de laboratório.
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