A avaliação da contagem de células sanguíneas, ou seja, glóbulos vermelhos (hemácias), glóbulos brancos (leucócitos) ou plaquetas, por meio de contadores de células manuais e automatizados, é fundamental para o diagnóstico e tratamento de doenças hematológicas. Com poucas exceções, a maioria dos métodos manuais está sendo substituída por métodos automatizados de contagem de partículas. A seleção de analisadores, com seus diversos princípios e técnicas tecnológicas, torna-se ainda mais complexa devido à adição de novos parâmetros e sua utilidade específica ao longo do processo de atendimento ao paciente.
A geração atual de analisadores hematológicos está equipada com parâmetros específicos novos e aprimorados, que são úteis aos médicos não apenas para informações diagnósticas, mas também fornecem um valor prognóstico inestimável para seus pacientes. Muitos novos parâmetros hematológicos foram adicionados pelos fabricantes de instrumentos, alguns com apenas terminologia diferente, mas com valor clínico semelhante aos já disponíveis anteriormente.
Os glóbulos brancos, ou leucócitos, são uma parte importante do sistema imunológico, pois são responsáveis por proteger o corpo contra infecções e organismos invasores. O diferencial de leucócitos determina a porcentagem de cada tipo de glóbulo branco presente no sangue. Um diferencial também pode detectar glóbulos brancos imaturos e anormalidades, ambos sinais de possíveis problemas.
Existem cinco tipos de leucócitos (linfócitos, monócitos, neutrófilos, eosinófilos e basófilos). Com exceção dos basófilos, estes podem ser visualizados na Matriz LMNE (Figura 1) dos analisadores hematológicos Yumizen.
Figura 1: Matriz LMNE
Nessa matriz, a extinção óptica (eixo Y) é plotada em função dos volumes (eixo X) para formar uma imagem com vários aglomerados de células.
Os analisadores hematológicos Yumizen caracterizam-se pela capacidade de gerenciar com precisão volumes de sangue total, além do seu alto nível de automação. Isso permite a definição precisa de dois parâmetros adicionais para as populações de leucócitos: linfócitos atípicos (ALY) e células imaturas grandes (LIC), relatados em porcentagem e em contagens absolutas.
As células iniciadoras de leucócitos (LICs) são um subconjunto minoritário de leucócitos normalmente encontrados no tecido da medula óssea, onde ocorre a hematopoiese. Esse subconjunto consiste em várias formas imaturas de células mieloides ou linfoides combinadas. Em certas condições clínicas ou mesmo fisiológicas, as LICs, não totalmente maduras, especialmente em termos de tamanho e complexidade, podem ser liberadas na corrente sanguínea periférica. Assim, elas apresentam tamanho maior do que as células sanguíneas maduras normais e são imaturas em sua complexidade nuclear e na extensão de sua granularidade citoplasmática.
Esses eventos ocorrem tanto em distúrbios benignos (reativos ao estresse, infecção ou regeneração da medula óssea) quanto em distúrbios neoplásicos (distúrbios mieloproliferativos, leucemias ou distúrbios linfoproliferativos). Entre os LICs, podemos encontrar (1):
• Promonócitos • Monoblastos • Metamielócitos • Mielócitos • Promielócitos • Mieloblastos • Blastos (mieloides ou linfoides) • Prolinfócitos • Megacariócitos
Diversas doenças do sangue foram investigadas por biólogos e o parâmetro LIC apresentou uma correlação aceitável entre as contagens automáticas e manuais. Esse parâmetro foi definitivamente utilizado para fins de sinalização. Devemos reconhecer que ele foi projetado para detectar e sinalizar células anormais na amostra com base em atributos eletro-ópticos, sendo necessária uma análise citológica mais aprofundada para fornecer mais informações sobre a condição do paciente.
Nos instrumentos de última geração da série Yumizen H da HORIBA, os LICs totais são representados como a soma de IMM (Monócito Imaturo), IML (Linfócito Imaturo) e IMG (Granulócito Imaturo) (2). Essas células, quando apresentadas ao analisador, são identificadas como um grupo separado na Matriz LMNE (Figura 2).
Figura 2: LICs na Matriz LMNE
O parâmetro LIC é, portanto, usado para sinalizar amostras que contêm as subpopulações celulares mencionadas acima.
O parâmetro LIC, juntamente com IMM, IML e IMG, é fornecido pelos analisadores Yumizen H1500 e H2500 apenas para fins de pesquisa (RUO) e deve ser interpretado com cautela. No entanto, buscamos aprimorar essas informações adicionais fornecidas pelo analisador, determinando um intervalo de referência para uma determinada população.
O estudo foi realizado de acordo com a diretriz CLSI C28-A3 (Definição, Estabelecimento e Verificação de Intervalos de Referência em Laboratório Clínico). Um total de 240 amostras de sangue total (120 homens e 120 mulheres, maiores de 18 anos) coletadas em EDTA de doadores caucasianos aparentemente saudáveis foram analisadas em duplicata em três instrumentos: dois Yumizen H2500 e um Yumizen H1500. As amostras foram mantidas à temperatura ambiente entre a coleta e a análise. O intervalo de referência foi determinado de forma a incluir os limites de referência inferior e superior, que abrangem 95% dos valores da população de referência. Os resultados são apresentados na Tabela 1.
Tabela 1: Limites de referência inferior e superior determinados pelo estudo para o parâmetro LIC comparados com valores de dados bibliográficos (3, 4).
Como os valores obtidos variam de acordo com a população amostral e/ou localização geográfica, recomenda-se fortemente que cada laboratório estabeleça seus próprios intervalos de referência com base na população local. Nesse contexto, de acordo com o § 5.5.2 da norma ISO 15189:2012, o laboratório deve definir os intervalos de referência biológicos ou valores de decisão clínica para um parâmetro específico, a fim de validar o resultado de um teste. Os intervalos de referência devem ser baseados em valores normais observados após uma série de testes em uma população saudável ou, caso não seja possível utilizar esse método, em dados científicos confiáveis.
Alarme LIC: O alarme morfológico de células imaturas grandes (LIC) aparece quando o número de partículas contadas em uma determinada área da matriz LMNE (Figura 1) é maior que o limite estabelecido pelo LIC# ou LIC% de partículas contadas em relação ao número total de leucócitos. Com base em nosso estudo interno e nos dados bibliográficos, os valores de alarme LIC são definidos em 3% e 0,30# (Tabela 2).
Tabela 2: Limites de corte definidos pelo instrumento (valores altos de -h e valores críticos de -H).
Um pequeno número de blastos e monócitos pouco diferenciados é comumente encontrado no sangue periférico de indivíduos saudáveis (5). Durante o estudo, também observamos um número maior de células grandes e imaturas em homens, em comparação com mulheres. No entanto, seu número permanece pequeno, apesar da variabilidade dos resultados obtidos, às vezes, para o mesmo indivíduo.
Deve-se ter cautela ao interpretar os resultados da contagem de células líquidas no sangue (LIC) em pacientes pediátricos, especialmente neonatos, devido à imaturidade do sistema imunológico e ao maior número de células imaturas na circulação sanguínea.
Populações mieloides imaturas, como promielócitos-mielócitos, metamielócitos, neutrófilos em bastonete, precursores monocitoides e monócitos ativados, são liberadas em doenças infecciosas, especialmente como resposta inicial. Nesse contexto, um "desvio à esquerda" é um termo usado para indicar a presença de leucócitos jovens/imaturos. Isso sugere que a infecção/inflamação presente induziu uma resposta da medula óssea com aumento da produção de leucócitos, seguida de liberação precoce na corrente sanguínea, mesmo antes de atingirem a maturação completa. O médico deve estar atento se uma amostra com esse sinal de desvio à esquerda for de um indivíduo imunocomprometido ou em estado crítico.
A sensibilidade para sinalizar um desvio à esquerda nos analisadores hematológicos Yumizen aumenta com o aumento da proporção de bandas de neutrófilos, metamielócitos, mielócitos e promielócitos (6, 10).
A síndrome mielodisplásica (SMD) é uma condição na qual as células-tronco presentes na medula óssea não conseguem amadurecer normalmente em glóbulos vermelhos, glóbulos brancos e plaquetas. Micromegacariócitos circulantes, múltiplos núcleos pequenos separados por filamentos de material nuclear e grandes células mononucleares com características nucleares dismórficas foram descritos no sangue periférico de pacientes com SMD. Embora existam vários critérios complementares que auxiliam na confirmação do diagnóstico de SMD, incluindo estudos com citometria de fluxo, histologia e imuno-histoquímica da medula óssea ou marcadores moleculares, a presença de células mononucleares do sangue periférico (CMS) pode ser um primeiro sinal de alerta para um problema clínico grave (7, 8).
Há dez anos, HORIBA introduziu a análise diferencial estendida de 5 partes, que compreende a contagem de granulócitos imaturos, monoblastos e linfoblastos com base em medições de volume e extinção óptica, com duas populações adicionais: os LICs (células iniciadoras de leucócitos) e os ALYs (linfoblastos anormais). Desde então, o parâmetro LIC tem sido usado para sinalizar amostras contendo leucócitos anormais. Quando leucócitos imaturos ou anormais estão presentes, os resultados da análise diferencial automatizada justificam uma revisão manual do esfregaço sanguíneo. Comparados a produtos similares, os analisadores hematológicos Yumizen apresentam bom desempenho nas análises diferenciais de leucócitos de 5 partes e nos LICs, com forte correlação com a análise citológica microscópica (9, 10).
Considerado isoladamente, o parâmetro LIC oferece pouca informação, mas, mesmo assim, continua sendo uma informação suplementar valiosa, obtida rapidamente, sem qualquer reagente adicional e, portanto, sem custo adicional.
1. DP.Lokwani, O ABC do Hemograma Completo, Interpretação do Hemograma Completo e Histogramas, JP Medical Ltd, 2013
2. Estudos de Caso Clínicos, Guia de Interpretação para Analisadores Hematológicos de 5 Partes da Série HORIBA ABX
3. C. Sultan / M. Gouault - Helman / M. Imbert, AIDE MEMOIRE D'HEMATOLOGIE. Serviço Central de Hematologia do Hospital Henri Mondor, Faculdade de Medicina de Créteil (Paris XII). 1998 Troussard X, Vol S,
4. E. Cornet, V. Bardet, JP. Couaillac, C. Fossat, JC. Luce, E Maldonado, V. Siguret, J. Tichet, O. Lantieri, J. Corberand. Valores normais de referência do hemograma completo para adultos na França. Jornal de Patologia Clínica (2014) 67 (4): 341-4.
5. J. Oertel, B. Oertel, J. Schleicher, D. Huhn, Detecção de um pequeno número de células imaturas no sangue de indivíduos saudáveis. Journal of Clin Pathology, 1998;51:886–890
6. R Siekmeier 1 , A Bierlich, W Jaross, O diferencial de glóbulos brancos: três métodos comparados, Química Clínica e Medicina Laboratorial, maio de 2001;39(5):432-45.
7. GA Hamid, AW Al-Nehmi e S. Shukry, Diagnóstico e Classificação da Síndrome Mielodisplásica. Livro: Desenvolvimentos Recentes em Síndromes Mielodisplásicas, 30 de janeiro de 2019, IntechOpen.
8. Peter L. Greenberg, James E. Thompson, MD, e Peter Westervelt, MD, PhD, Síndromes mielodisplásicas. Diretrizes de prática clínica em oncologia. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. Janeiro de 2011; 9(1): 30–56
9. M. Mateckaa e O. Ciepielaa, Comparação dos analisadores hematológicos automatizados Sysmex-XN 2000 e Yumizen H2500, Medicina Laboratorial Prática. Nov. 2020; 22: e00186.
10. ME. Arroyo, MD. Tabernero, MA. García-Marcos, A. Orfao, Desempenho analítico do analisador automatizado de células sanguíneas PENTRA 80 para a avaliação de leucócitos normais e patológicos, American Journal of Clinical Pathology, fevereiro de 2005;123(2):206-14.
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