► Kliknij tutaj, aby pobrać oryginalny plakat (PDF)
Dr Parag Dharap 1, Shubham Rastogi 2, Aaruni Agarwal 2, Sébastien Raimbault 3, Manuela Pastore 3, Esther Tournier 3
1 Centrum Diagnostyczne dr. Dharapa, Mumbaj, 2 HORIBA Medical India, New Delhi, 3 HORIBA Medical Montpellier, Francja
Wraz z nadejściem monsunów, zarówno publiczne szpitale, jak i prywatne laboratoria kliniczne w Indiach, są zalewane prośbami o badania w kierunku gorączki o nieznanym pochodzeniu, a w szczególności malarii. Ze względu na duże obciążenie pracą konieczne jest opracowanie metod skutecznego przesiewania i filtrowania próbek, aby ułatwić pracę mikroskopistom. Większość tych ośrodków jest wyposażona w trójdzielne analizatory hematologiczne. Chcielibyśmy przedstawić nasze doświadczenia w wykrywaniu malarii w prywatnym laboratorium klinicznym, do którego trafia duża liczba zleceń dotyczących morfologii krwi, w celu zbadania jej pod kątem malarii lub jako część profilu gorączki o nieznanym pochodzeniu.
Nasze badanie zostało przeprowadzone w celu oceny, czy flagi generowane w histogramach WBC w liczniku komórek hematologicznych z 3-częściowym podziałem różnicowym mogą być pomocne jako ważne narzędzie diagnostyczne wspomagające w badaniach przesiewowych na malrię. Określono indeks pasożytniczy i zbadano jego korelację z nieprawidłowościami wykrytymi w analizatorze hematologicznym.
Pobrano próbki krwi od pacjentów, którzy zgłosili się z prośbą o przeprowadzenie badań w kierunku malarii lub ostrej choroby gorączkowej w lipcu i listopadzie 2014 r.
Wszystkie próbki krwi, w których rozmaz krwi obwodowej barwiony metodą Fielda dał wynik dodatni w kierunku malarii, zostały poddane dalszej analizie i ocenione pod kątem indeksu pasożytniczego oraz rodzaju i gatunku pasożytów wywołujących malarię na 2000 erytrocytów. Następnie te próbki krwi, które dały pozytywny wynik na malarię zostały, w ciągu 6 godzin od pobrania krwi, poddane analizie na analizatorze hematologicznym HORIBA Microsemi CRP, który jest trzyczęściowym różnicowym licznikiem krwinek.
Spośród 242 pacjentów, u których na podstawie rozmazów krwi barwionych metodą Fielda zdiagnozowano malarię, u 91 stwierdzono obecność flagi L1 na histogramie WBC. Zaobserwowano wyraźny i oddzielny pik (↘) pomiędzy 30 a 100 fl, zlokalizowany na ramieniu wstępującym małego piku komórkowego (pik limfocytów). Do innych najczęściej stwierdzanych nieprawidłowych parametrów należały podwyższony poziom MCV i trombocytopenia.
W trzyczęściowym różnicowym liczniku krwinek, ilościowe oznaczanie WBC przeprowadza się metodą impedancyjną za pomocą rozcieńczenia pełnej krwi rozcieńczalnikiem i lizerem. Oprócz lizy czerwonych krwinek działanie lizera powoduje albo rozerwanie błony cytoplazmatycznej białych krwinek, jak w przypadku limfocytów, albo powoduje wyciek cytoplazmy pozakomórkowo, co skutkuje zapadnięciem się błony wokół jądra i ziarnistości cytoplazmatycznych, jeśli są obecne. Gdy komórki przechodzą przez aperturę, powstaje impuls proporcjonalny do objętości komórki. Wygenerowane dane są następnie przekształcane i segregowane na obszary o małej objętości komórek, co umożliwia klasyfikację leukocytów: (30 do 100 fl) zajmowany przez limfocyty, obszar środkowy komórek (100 – 150 fl) zajmowany przez monocyty i aktywowane limfocyty oraz obszar dużych komórek (150 – 400 fl) zajmowany przez granulocyty. Po lizie erytrocytów, odsłonięte wewnątrzkomórkowe formy pasożytnicze malarii, oporne na działanie lityczne, generują niewielkie impulsy podczas przechodzenia przez aperturę. Ponieważ impulsy te są mniejsze od przeciętnych limfocytów, są one następnie przedstawiane jako oddzielny szczyt w obszarze małych komórek. Donoszono, że inne elementy, takie jak agregaty płytek krwi i jądrzaste erytrocyty, aktywują tę flagę, której obecność lub brak można wykluczyć na podstawie badania rozmazu krwi obwodowej.
Wierzymy, że w przyszłości, dzięki zwiększonej czułości, charakterystyce danych i możliwości wykorzystania lizera różnicowego w trzyczęściowym różnicowym analizatorze hematologicznym, istnieje możliwość wygenerowania flagi podejrzenia malarii, która mogłaby być wykorzystywana jako ważne narzędzie diagnostyczne przez personel laboratoryjny.
Masz pytania lub prośby? Skorzystaj z tego formularza, aby skontaktować się z naszymi specjalistami.
