Nasze organizmy są nieustannie narażone na działanie patogenów występujących w środowisku, w tym wirusów, bakterii, pasożytów i grzybów. Odpowiedź immunologiczna odpowiada za ochronę przed nimi za pomocą szerokiego wachlarza mechanizmów. W procesie tym pośredniczą białe krwinki (WBC), zwane również leukocytami, do których zaliczają się neutrofile, eozynofile (kwasofile), bazofile, limfocyty i monocyty. Odporność wrodzona i nabyta współdziałają, zapewniając nam ochronę (1).
Komórki białokrwiste o właściwościach fagocytarnych (w szczególności neutrofile) stanowią, wraz z makrofagami tkankowymi, część wrodzonej gałęzi układu odpornościowego i pełnią szereg różnych funkcji, takich jak wywoływanie odpowiedzi immunologicznej oraz komunikacja międzykomórkowa. Limfocyty pośredniczą w adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej poprzez działania specyficzne względem antygenów.
Komórki plazmatyczne, których zwykle nie występują we krwi obwodowej, są zróżnicowanymi limfocytami typu B. Nie namnażają się, są znacznie większe od komórek B i mogą wydzielać duże ilości przeciwciał (2).
W badaniu mikroskopowym rozmazów krwi limfocyty mają regularne, kuliste jądro oraz wysoki stosunek objętości jądra do cytoplazmy. Cytoplazma, której objętość jest zmienna, barwi się na bladoniebiesko w barwieniu metodą Romanowskiego i jest przezroczysta lub zawiera nieliczne, małe różowe ziarnistości. Obecność ziarnistości w większej komórce o większej ilości cytoplazmy może wskazywać, że komórka ta jest limfocytem T, jednak do dalszego rozróżnienia poszczególnych podtypów limfocytów konieczne jest przeprowadzenie immunofenotypowania (3).
Pełna morfologia krwi (CBC) to wysoce zautomatyzowane badanie laboratoryjne, które dostarcza danych dotyczących wszystkich komórek krwi. Częścią badania CBC jest różnicowanie leukocytów, które pozwala zidentyfikować i policzyć różne typy prawidłowych komórek krwi, a także dostarcza dodatkowych pomiarów i sygnalizuje obecność atypowych, nieprawidłowych i niedojrzałych leukocytów.
W analizatorach hematologicznych serii Yumizen komórki białokrwiste można wizualizować na wykresie rozproszenia Diff lub w macierzy LMNE (rysunek 1). W tej macierzy ekstynkcja optyczna (oś Y) jest przedstawiona w funkcji objętości (oś X), tworząc obraz z kilkoma skupiskami zdarzeń komórkowych. Macierz posiada progi – niektóre stałe, a inne ruchome – co pozwala na określenie różnych populacji oraz wykrycie nieprawidłowości.
Rycina 1: Limfocyty (LYM) i ALY na matrycy LMNE
Dzięki tej precyzyjnej technologii analizatory hematologiczne Yumizen umożliwiają zidentyfikowanie dwóch dodatkowych populacji leukocytów istotnych z punktu widzenia komórek limfocytarnych: dużych komórek niedojrzałych (w tym niedojrzałych komórek limfoidalnych – IML) oraz limfocytów atypowych (ALY), których wyniki są podawane zarówno w wartościach procentowych, jak i w liczbach bezwzględnych.
Limfocyty atypowe to limfocyty, które uległy aktywacji w odpowiedzi na infekcję wirusową (czasami bakteryjną lub pasożytniczą). Komórki te charakteryzują się zwiększonymi rozmiarami oraz często aktywną syntezą białek, co powoduje pogłębienie niebieskiego zabarwienia cytoplazmy w barwieniu metodą Romanowskiego. Zwiększona aktywność może również powodować zmiany w jądrze komórkowym, nadając mu bardziej otwarty wygląd z możliwą obecnością jądreczek (4). Różnią się one zarówno pod względem szczegółów morfologicznych, jak i cech markerów powierzchniowych, co wskazuje, że stanowią one heterogeniczną mieszankę typów komórek wykazujących poliklonalną odpowiedź immunologiczną na stymulację antygenową. Limfocyty występują w rozmazach krwi w wielu odmianach. Limfocyty zmienione patologicznie są związane z licznymi chorobami. Na przykład w chłoniaku Burkitta można zaobserwować małe limfocyty oraz populację średniej wielkości komórek limfoidalnych o wysokiej aktywności proliferacyjnej i apoptycznej (ryc. 2).
Rycina 2: Różne nietypowe limfocyty zidentyfikowane w rozmazie krwi barwionym MGG w przypadku chłoniaka Burkitta
W analizatorach hematologicznych Yumizen parametr ALY jest udostępniany wyłącznie do celów badawczych (RUO). Różnorodność typów komórek występujących w tym obszarze matrycy LMNE oraz ich indywidualne cechy utrudniają określenie ostatecznych wartości granicznych dla ALY. W zależności od obecnych komórek może wystąpić nakładanie się wartości ALY na wartość IML populacji dużych komórek niedojrzałych (LIC).
Macierz wykorzystuje metodę ruchomego progu w celu optymalizacji wykrywania populacji ALY. Chociaż obszar ten zazwyczaj obejmuje duże limfocyty aktywowane i reaktywne, może również zawierać pewną liczbę małych blastów, komórek plazmatycznych oraz komórek nieprawidłowych charakterystycznych dla zaburzeń limfoproliferacyjnych, takich jak CLL, komórki Sezary’ego i tricholeukocyty (komórki włochate).
W przypadkach, gdy populacje są trudniejsze do rozróżnienia: limfocyty (LYM), monocyty (MON), neutrofile (NEU) oraz ALY (#, %) są oznaczane jako podejrzane, gdy nie zostanie wykryty próg rozdzielenia między obszarami limfocytów i monocytów (alarm SepLymMon) (rysunek 3), co pozwala osobie oceniającej podjąć dalsze działania, takie jak badanie rozmazów krwi.
Rysunek 3: Próg separacji wyzwalający alarm ALY na matrycy LMNE
Chociaż ALY są rzadkością u osób zdrowych, wyniki badań klinicznych są zazwyczaj interpretowane w odniesieniu do przedziałów referencyjnych opartych na populacji. W związku z tym przeprowadzono badanie przedziałów referencyjnych zgodnie z wytycznymi CLSI C28-A3 (Definiowanie, ustalanie i weryfikacja przedziałów referencyjnych w laboratorium klinicznym) dla parametru ALY na analizatorz Yumizen H2500 i H1500. W sumie 240 próbek krwi pełnej (120 od mężczyzn i 120 od kobiet w wieku powyżej 18 lat), pobranych w EDTA od zdrowych dawców rasy kaukaskiej, zostało poddanych analizie w dwóch powtórzeniach na trzech urządzeniach: dwóch analizatorach Yumizen H2500 i jednym Yumizen H1500. Próbki przechowywano w temperaturze pokojowej od momentu pobrania do wykonania badania. Przedział referencyjny określono tak, aby obejmował dolną i górną granicę referencyjną, które obejmują 95% wartości uzyskanych od osób z populacji referencyjnej. Wyniki przedstawiono w tabeli 1.
| Kobieta | Mężczyzna | Dane bibliograficzne (mężczyźni i kobiety) | |
| Dolna granica odniesienia (ALY%) | 0.20 | 0.20 | 0.00 |
| Górna granica odniesienia (ALY%) | 1.90 | 1.70 | 2.50 |
| Dolna granica odniesienia (ALY#) | 0.01 | 0.01 | 0.00 |
| Górna granica odniesienia (ALY#) | 0.14 | 0.09 | 0.20 |
Tabela 1: Dolne i górne granice odniesienia wyznaczone w badaniu dla parametru ALY w porównaniu do wartości z danych bibliograficznych (5, 6).
Obecność niewielkiej liczby limfocytów atypowych w większości próbek krwi ma prawdopodobnie niewielkie znaczenie kliniczne. Parametr ALY może jednak pomóc lekarzowi w potwierdzeniu diagnozy lub posłużyć do oceny rokowania. Limfocyty atypowe najczęściej występują w przypadku mononukleozy zakaźnej, toksoplazmozy, zapalenia wątroby i innych zakażeń wirusowych.
Atypowe limfocyty zaobserwowano również we krwi obwodowej pacjentów w wielu innych sytuacjach klinicznych, w tym w reakcjach immunologicznych związanych z przeszczepami i szczepieniami, chorobach kolagenowych i innych zaburzeniach autoimmunologicznych, nowotworach złośliwych, reakcjach na leki, niektórych zakażeniach bakteryjnych, a także w związku ze stosowaniem leków i stresem (7). W ostrej białaczce limfoblastycznej (ALL) z małymi blastami limfoblasty te często występują w obszarze ALY. Rysunek 4 przedstawia przykład ALL z komórek T, w której populacja limfoblastów występuje szczególnie w obszarze atypowych limfocytów matrycy LMNE.
Rycina 4: Populacja limfoblastów w ostrej białaczce limfoblastycznej T (ALL T)
W przewlekłej białaczce limfatycznej na obszarze ALY wykresu DIFF można również zaobserwować limfocyty atypowe i niedojrzałe komórki limfocytarne (8).
W tym obszarze może pojawić się niewielka, zwarta populacja komórek blastycznych pochodzących z ostrej białaczki szpikowej ze względu na ich mniejszy rozmiar. W takim przypadku zwartą populację komórek blastycznych można zaobserwować na matrycy LMNE pomiędzy obszarami limfocytów, limfocytów atypowych i monocytów; komórki te są odpowiednio oznaczone. W celu monitorowania przebiegu danej infekcji atypowe limfocyty (ALY) mogą służyć jako narzędzie prognostyczne. Na przykład u pacjentów z COVID-19 odnotowano obecność atypowych limfocytów krążących we krwi. Stwierdzono, że limfocyty reagujące na COVID-19 są związane z lepszym przebiegiem i rokowaniem choroby. Ich obecność sugeruje obfitą produkcję komórek T specyficznych dla wirusa, co wskazuje na lepsze rokowanie u pacjentów, u których komórki te występują w krwiobiegu (9, 10).
Współczesne analizatory o wysokiej wydajności zostały zaprojektowane tak, aby dostarczać jak najpełniejszych informacji na temat próbki. Dane te opierają się na wartościach progowych i złożonych algorytmach, a następnie muszą zostać starannie zinterpretowane przez lekarza. W tym kontekście parametr ALY dostarcza informacji, które mogą uzupełniać rutynowe parametry krwi i wzbogacać obraz kliniczny pacjenta. Może on również okazać się przydatny w leczeniu chorób lub do celów prognostycznych.
1. HC Allen, P. Sharma. Histologia, Komórki plazmatyczne, 28 stycznia 2021 r.
2. R. Warrington, W. Watson, H. Kim i F. Antonetti, Wprowadzenie do immunologii i immunopatologii, Alergia, astma i immunologia kliniczna, tom 7, numer artykułu: S1 (2011)
3. A. Adewoyin i B. Nwogoh, Rozmaz krwi obwodowej – recenzja, Ann Ib Postgrad Med. grudzień 2014; 12 ust. 2: 71–79.
4. MW Simon, Limfocyt nietypowy, International Pediatrics, styczeń 2003 r. 18(1):20-22
5. C. Sultan / M. Gouault - Helman / M. Imbert, AIDE MEMOIRE D'HEMATOLOGIE. Service Central d'Hématologie de l'Hôpital Henri Mondor, Faculté de médecine de Créteil (Paryż XII). 1998 Troussard X, tom S,
6. E. Cornet, V. Bardet, JP. Couaillac, C. Fossat, JC. Luce, E Maldonado, V. Siguret, J. Tichet, O. Lantieri, J. Corberand. Normalne wartości referencyjne pełnej morfologii krwi dla dorosłych we Francji. Journal of Clinical Pathology (2014) 67 (4): 341-4.
7. T. Shiftan, J. Mendelsohn, Krążący „atypowy” limfocyt, Human Pathology, styczeń 1978;9(1):51-61
8. Horiba Medical: Studium przypadku klinicznego. Yumizen H1500/H2500
9. A. Merino, J. Rodellar i wsp., Atypowe komórki limfoidalne krążące we krwi w zakażeniu COVID-19: morfologia, immunofenotyp i wartość prognostyczna. Journal of Clinical Pathology, grudzień 2020: jclinpath-2020-207087.
10. D. Gérard, S. Henry, B. Thomas, SARS-CoV-2: nowa etiologia atypowych limfocytów, Images In Haematology, 20 kwietnia 2020 r.
Automatyzacja badań hematologicznych
Analizator hematologiczny 3 diff
Analizator hematologiczny 3 diff
Analizator hematologiczny 3 diff
Analizator hematologiczny 3 diff
Analizator hematologiczny 3 diff
Masz pytania lub prośby? Skorzystaj z tego formularza, aby skontaktować się z naszymi specjalistami.
