Retikulocyty, prekursory czerwonych krwinek, odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu homeostazy organizmu. Powstające w szpiku kostnym czerwone krwinki tracą jądro komórkowe po dostaniu się do krwiobiegu. Te wczesne komórki krwi nadal zawierają RNA i kontynuują syntezę hemoglobiny przez kilka dni, zanim staną się dojrzałymi erytrocytami.
Liczba retikulocytów służy jako miara aktywności erytropoezy w szpiku kostnym i pozwala przewidzieć stan przyszłych czerwonych krwinek we krwi obwodowej. Wysoka liczba retikulocytów wskazuje na kompensacyjną odpowiedź na niedokrwistość, natomiast niska wartość może wskazywać na upośledzenie produkcji czerwonych krwinek.
Tradycyjnie liczenie retikulocytów wykonywano metodami manualnymi/wizualnymi – mikroskopowym liczeniem po barwieniu barwnikami supravitalnymi, takimi jak New Methylene Blue lub Brilliant Cresyl Blue, które barwią zawartość RNA.
Opracowano zautomatyzowane metody cytometryczne przepływu, aby poprawić precyzję i efektywność pomiarów. Liczenia są zautomatyzowane poprzez jednoczesny pomiar i analizę wielu cech fizycznych pojedynczych cząstek, w tym względnego rozmiaru, ziarnistości i intensywności fluorescencji.
HORIBA wykorzystuje cytometrię przepływową i pomiary impedancji z odczynnikiem zawierającym barwnik fluorescencyjny: oranż tiazolowy (TO). Ten specyficzny dla kwasu nukleinowego barwnik wiąże się z RNA, powodując znaczny wzrost emisji fluorescencji. Stopień emisji fluorescencji jest proporcjonalny do ilości RNA w erytrocycie.
Macierz retikulocytów powstaje na podstawie pomiarów objętości rezystywności i ortogonalnej fluorescencji komórek. Dojrzałe czerwone krwinki z niewielką ilością RNA lub bez niego wykazują minimalną fluorescencję, natomiast retikulocyty są rozdzielane na podstawie ich fluorescencji, która jest proporcjonalna do zawartości RNA i niedojrzałości.
Parametry retikulocytów
Parametry retikulocytów, w tym liczba retikulocytów (RET%; RET), RETL%, RETM%, RETH% i CRC, służą do oceny prawidłowych lub patologicznych stanów wpływających na erytropoezę. Parametry te dostarczają cennych informacji do diagnozowania anemii, oceny aktywności regeneracyjnej po leczeniu anemii, monitorowania pacjentów otrzymujących rekombinowaną ludzką erytropoetynę oraz wykrywania anemii sportowej i dopingu.
Niedojrzała frakcja retikulocytów (IRF)
Frakcja niedojrzałych retikulocytów (IRF) to stosunek niedojrzałych retikulocytów do całkowitej liczby retikulocytów. IRF jest przydatny do oceny stopnia erytropoezy, przewidywania wahań liczby RBC i diagnozowania rodzajów anemii.
Obliczana zawartość hemoglobiny w retikulocytach (RHCC)
Zawartość hemoglobiny w retikulocytach obliczana jest na podstawie ilości hemoglobiny produkowanej w szpiku kostnym i stanowi przydatny parametr służący do diagnozowania niedokrwistości spowodowanej niedoborem żelaza.
Parametr ten informuje o ilości funkcjonalnego żelaza, które może zostać włączone do hemoglobiny w erytrocytach w ciągu ostatnich 3–4 dni.
Obliczanie stężenia hemoglobiny w retikulocytach (RHCc) jest przydatne w następujących sytuacjach:
Średnia objętość retikulocytów (MRV)
Średnia objętość retikulocytów odnosi się do ogólnej objętości retikulocytów, które są naturalnie większe niż dojrzałe erytrocyty. Parametr ten jest przydatny w ocenie zaburzeń magazynowania żelaza i odpowiedzi na leczenie, przy czym u pacjentów z niedoborem żelaza wytwarzane są mniejsze retikulocyty.
Parametry retikulocytów dostarczają cennych informacji na temat aktywności erytropoetycznej i stanowią niezbędne narzędzie do diagnozowania i monitorowania różnych stanów klinicznych, w tym anemii, chorób szpiku kostnego i niedoboru żelaza. Rozwój metod cytometrii przepływowej znacznie poprawił dokładność i efektywność pomiaru retikulocytów, czyniąc te parametry niezbędnymi w nowoczesnych laboratoriach klinicznych.
1. Liczba retikulocytów i jej parametry: porównanie analizatorów automatycznych, cytometrii przepływowej i metody manualnej. Varun Uppal, Shano Naseem, Ishwar Bihana, Man Updesh, Singh Sachdeva, Neelam Varma
2. CLSI_H44-A2. Metody zliczania retikulocytów (automatyczne liczniki krwinek, cytometria przepływowa i barwniki supravital)
3. Rodrigo Proto-Siqueira. Parametry retikulocytów: dlaczego laboratoria kliniczne powinny je oceniać i raportować? Rev bras hematol hemoter. 2014; 36(1):3-4.
4. Lee LG, Chen CH, Chiu LA. Pomarańcz tiazolowy: nowy barwnik do analizy retikulocytów. Cytometria. 1986 listopad; 7(6):508-17.
5. Figuerres E, Olszewski M, Kletzel M. Technika cytometrii przepływowej z wykorzystaniem pomarańczy tiazolowej do wykrywania wszczepienia płytek krwi po przeszczepie komórek macierzystych u dzieci. Cytoterapia. 2001; 3(4):277-83.
Dr Prakash Suvasia, Specjalista ds. Nauki i Medycyny, HORIBA ABX SAS
Laurent Araud, Menedżer ds. Produktów Hematologicznych, HORIBA ABX SAS
Mandy Campbell, Kierownik ds. Produktów Weterynaryjnych, HORIBA ABX SAS
Masz pytania lub prośby? Skorzystaj z tego formularza, aby skontaktować się z naszymi specjalistami.
