Monitoramento de Vírus Adenoassociado (AAV) Biotinilado Complexado com Estreptavidina-Alexa Fluor 568 usando o Método de Impressão Digital Molecular Aqualog e A-TEEM

Uma análise rápida dos contornos A-TEEM nas Figuras 2A-2C corrobora a ideia de que o método A-TEEM pode ser sensível a diferenças entre capsídeos de AAV biotinilados e AAVs complexados com um conjugado proteína-corante. No entanto, a presença do corante Alexa Fluor 568 pode mascarar a fluorescência nativa, que poderia ser útil na quantificação dessas amostras. Demonstramos nesta nota que é possível diferenciar AAVs biotinilados de complexos AAV-corante em amostras não dialisadas, com quantidades significativas de corante livre e conjugado proteína-corante presentes. A análise PARAFAC separa o sinal do complexo em dois componentes principais, que parecem ser atribuíveis ao AAV e à treptavidina. Com amostras de referência padrão de cada um deles, prevemos que A-TEEM possa ser usado para criar um modelo quantitativo a partir do qual amostras desconhecidas possam ser quantificadas quanto à eficiência de complexação. A PCA foi utilizada para distinguir facilmente AAVs de conjugados proteína-corante e de complexos AAV-proteína-corante. Também conseguimos quantificar a remoção do corante livre e da estreptavidina não ligada da solução do complexo AAV durante a diálise.

Concluímos, portanto, que o Aqualog e A-TEEM, quando combinados com técnicas padrão de análise multivariada, como PARAFAC, PCA e HCA, podem ser usados para monitorar eficazmente a ligação e a purificação de materiais de AAV importantes para pesquisa e aplicações industriais.