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Validação do desempenho do HORIBA Aqualog para análises farmacêuticas e industriais
A-TEEM para Biotecnologia e Biofarmacêutica
Descubra o que a espectroscopia A-TEEM pode fazer pela análise farmacêutica.
A-TEEM é uma tecnologia proprietária de espectroscopia de fluorescência da HORIBA que adquire simultaneamente medições de absorbância, transmissão e matriz de excitação e emissão de fluorescência, corrigindo o efeito de filtro interno em tempo real.
A fluorescência é insensível a muitos excipientes comuns, enquanto é extremamente sensível a componentes que contêm anéis conjugados. Proteínas, APIs de pequenas moléculas, aminoácidos aromáticos e coenzimas (NADH, flavinas) são facilmente caracterizados, enquanto água, açúcares e outros excipientes comuns desaparecem.
A-TEEM pode ser usada para caracterizar componentes relevantes em matrizes complexas em níveis sub-ppb. Isso a torna ideal para a caracterização de muitos produtos biofarmacêuticos relevantes, como vacinas, insulina, vetores virais, conjugados anticorpo-fármaco, meios de cultura celular, exossomos, CRISPR/Cas9 e muito mais.
Como ferramenta espectroscópica, A-TEEM pode ser utilizado para análises de processos e para monitorar bioprocessos ou a pureza de amostras.
Colocar a amostra em uma cubeta geralmente é o único preparo necessário para a medição. Para algumas medições quantitativas, pode ser necessária a diluição da amostra. O Aqualog pode ser configurado para funcionar com um amostrador automático, permitindo a operação autônoma de múltiplas amostras.
O software Aqualog está totalmente equipado para facilitar a calibração e a validação de todas as funções instrumentais de absorbância e fluorescência, seguindo as especificações descritas nos Capítulos Gerais da USP para Espectroscopia de Fluorescência <USP 853> e Espectroscopia UV <USP 857>. Os protocolos de IQ/OQ garantem a instalação e a operação adequadas, de acordo com os requisitos.
A-TEEM é extremamente sensível a componentes que contêm anéis conjugados. Moléculas como proteínas, APIs de pequenas moléculas, aminoácidos aromáticos, coenzimas (NADH, flavinas), vitaminas, hidrolisados, subprodutos da contaminação bacteriana e compostos coloridos são facilmente caracterizadas.
Em contrapartida, excipientes comuns sem conjugação, como água, açúcares, glicerina, polietilenoglicol e outros, são invisíveis para A-TEEM.
A alta especificidade e seletividade das impressões digitais A-TEEM tornam-nas ideais para a caracterização de produtos biofarmacêuticos, permitindo análises quantitativas em níveis de ppb de misturas complexas.
A-TEEM tem sido utilizado para determinar a qualidade de meios de cultura basais e de alimentação, para monitorar bioprocessos, para monitoramento de reações e para a caracterização de vacinas, insulina, vetores virais, exossomos, conjugados anticorpo-fármaco, compostos CRISPR/Cas9 e muito mais.
As amostras são geralmente medidas em uma cubeta, que pode ser acoplada a um amostrador automático para medições não supervisionadas. Como ferramenta espectroscópica, A-TEEM pode ser utilizado para análises de processos, monitoramento de bioprocessos ou triagem de variações entre lotes em uma variedade de biomoléculas relevantes.
Medições baseadas em sondas, tanto em configurações de imersão quanto à distância, também são possíveis, com diversas opções de personalização disponíveis.
O HORIBA Aqualog UV-800 facilita a calibração e a validação de todas as medições instrumentais de absorbância e fluorescência, de acordo com os capítulos <857> Espectroscopia Ultravioleta-Visível e <853> Espectroscopia de Fluorescência da USP. O conjunto de ferramentas de calibração/validação é modular e intuitivo e, juntamente com a documentação de IQ/OQ HORIBA, orienta os usuários durante todo o processo de validação. Testes individuais de aprovação/reprovação podem ser selecionados para minimizar a redundância de testes e facilitar a realização de testes de rotina. O Aqualog possui suporte completo para instalações farmacêuticas e industriais, com um protocolo abrangente de IQ/OQ.
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Benefício da melhor sensibilidade molecular da categoria
Benefício da quantificação comparável a HPLC e GC
Vantagens de medições com alta seletividade e independentes da concentração:
O custo dos meios de cultura celular representa uma fração do valor do produto final; portanto, avaliar sua qualidade antes do início de uma biofermentação é uma maneira economicamente viável de garantir a qualidade e a quantidade do produto final. As abordagens padrão para realizar essa etapa crítica de controle de qualidade (cromatografia, espectrometria de massa, cultura de teste) são demoradas e caras. A-TEEM oferece uma abordagem robusta para avaliar a qualidade dos meios de cultura celular antes da adição de células, mesmo para meios complexos e não quimicamente definidos que utilizam suplementos de hidrolisado.
A-TEEM para caracterização de meios de cultura celular – aumente o rendimento dos produtos upstream.
Leia a publicação externa:
[Ryder, Alan G. (2018). Análise de meios de cultura celular usando métodos espectroscópicos rápidos. Current Opinion in Chemical Engineering, 22, 11-17. doi.org/10.1016/j.coche.2018.08.008
Leia a nota de aplicação:
Monitoramento da variabilidade de meios de cultura celular usando A-TEEM
As abordagens padrão baseadas em separações para a caracterização de vacinas são lentas demais para atender à demanda da indústria por análises rápidas. No entanto, as formulações típicas de vacinas (concentração proteica muito baixa, soluções aquosas, com excipientes que podem causar interferência) tornam essas amostras um grande desafio para as ferramentas espectroscópicas "padrão" (Raman, FT-IR, NIR). As capacidades do A-TEEM o tornam altamente adequado para a análise de vacinas. A-TEEM tem sido usado para diferenciar formulações de vacinas, detectar agregação, identificar substituições de aminoácidos e modificações pós-translacionais, rastrear variações entre lotes e realizar medições de controle de qualidade para a liberação de lotes.
A-TEEM para Caracterização de Vacinas – Diferenciar formulações semelhantes
Amostras fornecidas pela Dra. Laura Sagle do Centro de Pesquisa de Vacinas do NIH.
A-TEEM para Controle de Qualidade de Vacinas – Detecção de variações entre lotes
A implementação comercial de biofármacos depende de ferramentas analíticas avançadas para caracterização, com crescente ênfase em velocidade e sustentabilidade. A-TEEM demonstrou capacidade para resolver sorotipos de AAV (AAV2 e AAV9) e para quantificar com precisão a porcentagem de preenchimento da carga útil. Devido principalmente à alta sensibilidade da fluorescência, A-TEEM pode ser uma alternativa rápida e adequada a outros métodos, como a TEM, para caracterizar materiais de AAV, incluindo esses materiais de referência certificados.
A-TEEM para caracterização de AAV – diferencia sorotipos, determina rapidamente a proporção vazio/cheio.
A-TEEM foi avaliada quanto ao seu potencial para diferenciar tipos de exossomos. Padrões de exossomos (PC-3 e MCF7) e suas misturas foram avaliados. Os diferentes exossomos foram facilmente diferenciados pela A-TEEM, e um modelo PLS foi capaz de prever prontamente as concentrações dos dois componentes em amostras compostas pelos dois exossomos misturados em proporções conhecidas.
Com base nesses resultados iniciais, espera-se que A-TEEM possa ser usado como uma ferramenta rápida e econômica para a fabricação, permitindo encontrar contaminantes, detectar variações entre lotes e quantificar cargas úteis.
A-TEEM para Exossomos – Diferenciar e quantificar tipos de exossomos
As alterações no ambiente solvente local dos resíduos fluorescentes, monitoradas pelas impressões digitais A-TEEM fornecem informações sobre a agregação e a estrutura secundária da proteína. A insulina de ação curta e a de ação prolongada apresentam impressões digitais moleculares A-TEEM únicas, baseadas nos diferentes ambientes proteicos entre as formulações.
Fonte: “A-TEEM ™, uma nova técnica de impressão digital molecular: método de matriz de excitação-emissão de fluorescência e absorbância-transmissão simultâneas”, publicado em Methods and Applications in Fluorescence, Volume 6, Número 2 https://doi.org/10.1088/2050-6120/aaa818. Adquirido com Aqualog.
A-TEEM também foi utilizada para estudar a proporção de nanopartículas lipídicas (LNPs) intactas versus danificadas liberadas por diferentes dispositivos de nebulização. Para quantificar a integridade das LNPs durante o processo de nebulização, uma proteína fluorescente (calceína) foi encapsulada em diversas formulações de LNPs. A-TEEM foi utilizada para quantificar a quantidade relativa de calceína liberada durante esse processo. Essa medição caracteriza os dispositivos mais eficazes na administração de LNPs intactas aos pacientes.
Leia a publicação:
Degradação de formulações de administração de fármacos à base de lipídios durante a nebulização
A-TEEM pode ser usado para caracterizar componentes relevantes em matrizes complexas em níveis sub-ppb. Isso o torna ideal para a caracterização de muitos produtos biofarmacêuticos relevantes, como vacinas, insulina, vetores virais, conjugados anticorpo-fármaco, meios de cultura celular, exossomos, CRISPR/Cas9 e muito mais. Use os filtros abaixo para encontrar a aplicação mais adequada às suas necessidades.
Descubra informações sem precedentes sobre a qualidade da água e a saúde ambiental.
Espectroscopia A-TEEM
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