Monitorización del virus adenoasociado biotinilado (AAV) complejo a estreptavidina-alexa fluor 568 utilizando el método Aqualog y A-TEEM de huella molecular

Un vistazo rápido a los contornos de A-TEEM en la Figura 2A-2C apoya la idea de que el método A-TEEM puede ser sensible a las diferencias entre cápsides AAV biotiniladas y AAVs complejadas con un conjugado proteico-colorante. Sin embargo, se podría esperar que la presencia del colorante Alexa Fluor 568 oculte la fluorescencia nativa, lo cual podría ser útil para cuantificar estas muestras. En esta nota mostramos que es posible diferenciar los AAVs biotinilados de los complejos de colorantes AAV para muestras no dialisadas, con un presentimiento significativo de tintes libres y conjugados proteína-colorante. El análisis PARAFAC separa la señal del complejo en dos componentes principales que parecen atribuirse a AAV y treptavidina. Con muestras de referencia estándar de cada una de ellas, anticipamos que A-TEEM podrían utilizarse para crear un modelo cuantitativo contra el cual se podrían cuantificar muestras desconocidas para la eficiencia de la complejación.  La PCA se utilizó para distinguir fácilmente los AAV de los conjugados de colorantes proteicos y de los complejos AAV-proteína-colorante. También pudimos cuantificar la eliminación de tinte libre y estreptavidina no unida de la solución del complejo AAV durante la diálisis.

Por tanto, concluimos que el Aqualog y el A-TEEM, cuando se combinan con técnicas estándar de análisis multivariante como PARAFAC, PCA y HCA, pueden utilizarse para monitorizar eficazmente la unión y purificación de materiales AAV importantes para la investigación y aplicaciones industriales.