La imagen por resonancia plasmónica superficial (SPRi) es una técnica de detección óptica sin etiqueta utilizada para monitorizar y analizar interacciones biomoleculares en tiempo real. La capacidad de imagen permite a los usuarios visualizar toda el área de trabajo y trabajar en formato multiplex.
La multiplexación significa que diferentes tipos de ligandos pueden ser inmovilizados en un solo SPRi-Biochip. También permite el estudio de muchos parámetros al mismo tiempo (concentración, pH de inmovilización, etc.), lo que facilita comparar, clasificar y seleccionar moléculas.
Nuestra tecnología mide modificaciones en el índice de refracción en la superficie del SPRi-Biochip, que pueden correlacionarse con variaciones de masa. Puede utilizarse para detectar moléculas que interactúan en tiempo real, determinar la concentración del analito y la afinidad de la interacción.
SPRi permite la caracterización completa de las interacciones biomoleculares (especificidad, cinética y afinidad), lo que a su vez puede proporcionar información sobre una solución de muestra (cantidad de moléculas).
Se puede analizar una vasta biblioteca de muestras. Incluyen proteínas, péptidos, ácidos nucleicos, carbohidratos, bacterias, células, polímeros, moléculas orgánicas pequeñas y más.
SPRi se utiliza para monitorizar los cambios del índice de refracción que ocurren en la superficie del biochip SPRi. Un evento de unión, o acumulación de masa, inducirá un cambio en el índice de refracción y un desplazamiento en la posición del ángulo de resonancia. SPRi sigue las variaciones de reflectividad que ocurren en un ángulo fijo (ángulo de trabajo) en función del tiempo. El principio se describe en el siguiente diagrama:
Fig.1: Monitorización de interacciones moleculares por SPRi.
Paso A:
Los ligandos están inmovilizados en formato de matriz sobre la superficie funcionalizada del SPRi-Biochip.
Paso B:
Cuando la solución de la muestra se inyecta en la celda de flujo, puede producirse una unión molecular. Esto induce un desplazamiento de las curvas plasmónicas y un aumento de la reflectividad. Las curvas cinéticas (sensorgramas) muestran las variaciones de reflectividad en función del tiempo (fase de asociación). El proceso también puede monitorizarse mediante la imagen de diferencia SPRi. Las manchas blancas corresponden a áreas interactivas del biochip SPRi.
Paso C:
Cuando la solución de la muestra sale de la celda de flujo, los complejos ligando-analito se disocian. Esto induce un desplazamiento de las curvas plasmónicas y una disminución de la reflectividad. Las curvas cinéticas muestran las variaciones de reflectividad frente al tiempo (fase de disociación). El proceso también puede monitorizarse en la imagen de diferencia SPRi a medida que los puntos que interactúan se oscurecen.
Paso D:
Cuando todos los complejos ligando-analito están completamente disociados (a veces usando una solución de regeneración), las curvas de plasmones y las curvas cinéticas vuelven al estado inicial. La imagen de diferencia SPRi vuelve a estar en negro.