La microscopía Raman es la combinación inteligente de la microscopía confocal óptica con la espectroscopía Raman. Una gran ventaja de los microscopios ópticos es la capacidad de observar células vivas. Es posible observar una amplia gama de actividad biológica, como la absorción de alimento, la división celular y el movimiento. Además, es posible utilizar técnicas de tinción in vivo para observar la absorción de pigmentos coloreados por las células. Estos procesos difícilmente pueden observarse en tiempo real usando microscopios Raman, debido a los largos tiempos de adquisición y microscopios electrónicos, ya que la muestra debe ser fijada y deshidratada (y por tanto suele estar muerta). El bajo coste de los microscopios ópticos los hace útiles en una amplia variedad de áreas, como la educación y las aplicaciones médicas.
Los siguientes puntos destacan las principales ventajas de Raman:
Análisis químico/molecular detallado
La espectroscopía Raman ofrece una caracterización muy detallada de muestras mediante la sondación de vibraciones individuales de enlaces químicos. Como resultado, un espectro Raman es rico en información y contiene datos relacionados con la estructura química específica del material que se analiza. Puede utilizarse para caracterizar completamente la composición de un material, y es posible identificar rápidamente materiales desconocidos mediante el uso de extensas bases de datos espectrales Raman.
Información sutil (cristalinidad, polimorfismo, fase)
Más allá de la identificación y caracterización general de materiales, la espectroscopía Raman también explora efectos químicos más sutiles, como la cristalinidad, el polimorfismo, la fase, el estrés/deformación intrínseco, el plegamiento de proteínas y los enlaces de hidrógeno.
Velocidad
La espectroscopía Raman es una técnica muy rápida, que normalmente requiere solo unos segundos para obtener un espectro de buena calidad. No se requiere preparación de muestras, por lo que el rendimiento de muestra es alto.
No hay preparación de muestras
A diferencia de muchas técnicas analíticas que requieren la preparación de la muestra (como disolución, molienda, formación de vidrio o prensado) para obtener resultados, el análisis Raman puede realizarse sobre muestras 'tal como se reciben' sin preparación. Esto es cierto tanto si una muestra es sólida, líquida, en polvo, en suspensión o en gas.
No destructiva
La espectroscopía Raman es una técnica completamente no destructiva: es sin contacto, no destructiva y no requiere preparación de muestras. Por ello, es posible analizar muestras como pigmentos históricos o pruebas forenses vitales, y conservar la muestra para su análisis adicional mediante otras técnicas si es necesario.
Resolución espacial microscópica
Cuando se realiza con un microscopio Raman confocal, la espectroscopía Raman ofrece al analista análisis microscópico de alta sensibilidad con resoluciones espaciales submicrísticas. Así, se pueden analizar los granos y partículas individuales, así como regiones específicas de una muestra. La microespectroscopía Raman conserva todas las ventajas anteriores.
Análisis confocal
Un microscopio Raman confocal verdadero proporciona resolución espacial 3D completa, permitiendo el análisis de un volumen discreto en una muestra transparente. Esta propiedad es especialmente útil para el análisis de muestras estratificadas (como laminados poliméricos), inclusiones (como las que se encuentran en vidrio y minerales), muestras finas sobre un sustrato (como células y tejido en una lámina de microscopio) y materiales en recipientes de vidrio/plástico (como un líquido en botella).
Adecuado para análisis in situ, in vitro e in vivo
Dado que la espectroscopía Raman es una técnica sin contacto y no destructiva, es adecuada para un análisis verdadero in situ. Puede utilizarse para sondar reacciones químicas dentro de un recipiente de reacción, sin alterar la reacción de ninguna manera. La tolerancia de la espectroscopía Raman al agua permite además su uso para análisis in vitro e in vivo; ejemplos incluyen el análisis de cosméticos en la piel, la caracterización de células individuales para microbiología y las interacciones fármaco-célula para el diseño inteligente de fármacos.
Raman comparado con micro-FTIR
Raman se compara a menudo con FTIR, que es el estándar de oro en espectroscopía molecular. Las dos técnicas son complementarias.
Ventajas de Raman sobre la IR:
No hay muchas cosas que estos dos tipos de microscopios tengan en común. Tanto el microscopio electrónico como el óptico son dispositivos técnicos que se utilizan para visualizar estructuras físicas y químicas demasiado pequeñas para verlas a simple vista, y ambos tipos tienen áreas de aplicación relevantes en biología y ciencias de los materiales. Generalmente, los microscopios Raman y electrónicos tienen diferentes áreas de aplicación y se complementan entre sí.
El microscopio Raman tiene las siguientes ventajas:
Ambas técnicas son complementarias para evaluar la estructura cristalina de ciertos materiales.
Ventajas de Raman frente a XRD
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