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Validación del rendimiento del HORIBA Aqualog para análisis farmacéuticos e industriales
A-TEEM para Biotecnología y Biofarmacéutica
Aprende qué puede hacer A-TEEM espectroscopía en el análisis farmacéutico.
A-TEEM es la tecnología patentada de espectroscopía de fluorescencia de HORIBA que adquiere simultáneamente las mediciones de Excitación y Matriz de Emisión y Excitación de Absorbancia, Transmisión y Fluorescencia, corrigiendo el efecto del filtro interno en tiempo real.
La fluorescencia es insensible a muchos excipientes comunes, aunque es extremadamente sensible a componentes que contienen anillos conjugados. Las proteínas, pequeñas moléculas API, aminoácidos aromáticos y coenzimas (NADH, flavinas) se caracterizan fácilmente, mientras que el agua, los azúcares y otros excipientes comunes desaparecen.
A-TEEM pueden usarse para caracterizar componentes relevantes en matrices complejas hasta niveles sub-ppb. Esto lo convierte en un encaje natural para la caracterización de muchos productos biofarmacéuticos relevantes como vacunas, insulina, vectores virales, conjugados de fármacos anticuerpos, medios celulares, exosomas, CRISPr/CAS9 y más.
Como herramienta espectroscópica, A-TEEM pueden desplegarse para análisis de procesos y para monitorizar bioprocesos o la pureza de muestras.
Poner una muestra en una cubeta, a menudo es la única preparación necesaria para la medición. Para algunas mediciones cuantitativas, puede ser necesaria la dilución de la muestra. El Aqualog puede configurarse para funcionar con un automuestreador para la operación no supervisada de múltiples muestras.
El software Aqualog está completamente equipado para facilitar tanto la calibración como la validación de todas las funciones instrumentales de absorbancia y fluorescencia siguiendo las especificaciones descritas en los Capítulos Generales de USP para Espectroscopía de Fluorescencia <USP 853> y Espectroscopía UV <USP857>. Los protocolos IQ/OQ garantizan una instalación y funcionamiento adecuados según los requisitos.
A-TEEM es extremadamente sensible a los componentes que contienen anillos conjugados. Moléculas como proteínas, APIs de pequeñas moléculas, aminoácidos aromáticos, coenzimas (NADH, Flavinas), vitaminas, hidrolizados, subproductos de la contaminación bacteriana y compuestos coloreados son fácilmente caracterizables.
En cambio, los excipientes comunes sin conjugación, como el agua, los azúcares, la glicerina, el polietilenglicol y otros, son invisibles para A-TEEM.
La alta especificidad y selectividad de las huellas dactilares de A-TEEM la convierten en un encaje natural para la caracterización de productos biofarmacéuticos, permitiendo el análisis cuantitativo a niveles de ppb de mezclas complejas.
A-TEEM se ha utilizado para determinar la calidad de los medios basales y de alimentación, para monitorizar bioprocesos, monitorizar reacciones y caracterizar vacunas, insulina, vectores virales, exosomas, conjugados de fármacos anticuerpos, exosomas, compuestos CRISPr/CAS9 y más.
Las muestras se miden con mayor frecuencia en una cubeta, que puede acoplarse a un auto-muestreador para mediciones no atendidas. Como herramienta espectroscópica, A-TEEM pueden desplegarse para análisis de procesos, para monitorizar bioprocesos o detectar variaciones de lote a lote entre diversas biomoléculas relevantes.
También son posibles mediciones basadas en sonda en configuraciones de inmersión o de distancia, con muchas opciones de personalización disponibles.
El HORIBA Aqualog UV-800 facilita tanto la calibración como la validación de todas las mediciones instrumentales de absorbancia y fluorescencia, según los capítulos USP <857> Espectroscopía Ultravioleta-Visible y <853> Espectroscopía de Fluorescencia. La Caja de Herramientas de Calibración/Validación es modular e intuitiva, y junto con HORIBA documentación IQ/OQ, guía a los usuarios durante el proceso de validación. Las pruebas individuales de aprobado/suspenso pueden seleccionarse individualmente para minimizar la redundancia de pruebas y facilitar pruebas más rutinarias. El Aqualog está totalmente soportado para instalaciones farmacéuticas e industriales con un protocolo completo de IQ/OQ.
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Beneficio de la mejor sensibilidad molecular
Beneficio de la cuantificación comparable a HPLC y GC
Beneficios de mediciones de alta selectividad y de la concentración independiente:
El coste del medio de cultivo celular es una fracción del valor del producto final, por lo que evaluar su calidad antes del inicio de una biofermentación es una forma rentable de garantizar la calidad y cantidad del producto final. Los enfoques estándar para realizar este paso crítico de control de la calidad (cromatografía, espectrometría de masas, cultivo de pruebas) son costosos y consumen mucho tiempo. A-TEEM proporciona un enfoque robusto para evaluar la calidad de los medios de cultivo celular antes de la adición de células, incluso para medios complejos no definidos químicamente que utilizan suplementos de hidrolizado.
A-TEEM para la caracterización de medios celulares – impulsar los rendimientos de producto aguas arriba
Lee la publicación externa:
[Ryder, Alan G. (2018). Análisis de medios de cultivo celular utilizando métodos espectroscópicos rápidos. Opinión actual en Ingeniería Química, 22, 11-17. doi.org/10.1016/j.coche.2018.08.008
Lee la nota de solicitud:
Monitorización de la variabilidad del medio de cultivo celular usando A-TEEM
Los enfoques estándar basados en separaciones para la caracterización de vacunas son demasiado lentos para satisfacer la demanda del sector de análisis rápidos. Sin embargo, las formulaciones típicas de vacunas (concentración muy baja de proteínas, soluciones acuosas, con excipientos confusos) hacen que estas muestras sean muy desafiantes para la caja de herramientas espectroscópica "estándar" (Raman, FT-IR, NIR). Las capacidades de A-TEEM lo hacen muy adecuado para el análisis de vacunas. A-TEEM se ha utilizado para diferenciar formulaciones de vacunas, detectar agregación, identificar sustituciones de aminoácidos y modificaciones postraduccionales, detectar variaciones de lote a lote y realizar mediciones de control de calidad para la liberación por lotes.
A-TEEM para la caracterización de vacunas – Diferenciar formulaciones similares
Muestras proporcionadas por la Dra. Laura Sagle en el Centro de Investigación de Vacunas del NIH
A-TEEM para control de calidad de vacunas – Detectar variación de lote a lote
El despliegue comercial de bioterapéuticas depende de herramientas analíticas avanzadas para la caracterización, con un énfasis creciente en la rapidez y la sostenibilidad. A-TEEM ha demostrado la capacidad de resolver los serotipos AAV (AAV2 y AAV9) y de cuantificar con precisión el porcentaje de llenado de la carga útil. A-TEEM, principalmente debido a la alta sensibilidad de la fluorescencia, podría ser una alternativa rápida adecuada a otros métodos como el TEM para caracterizar materiales AAV, incluidos estos materiales de referencia certificados.
A-TEEM para la caracterización de AAV – diferenciar los serotipos, determinar rápidamente la relación vacía/lleno
A-TEEM fue evaluado por su potencial para diferenciar tipos de exosomas. Se evaluaron los estándares de exosomas (PC-3 y MCF7) y sus mezclas. Los diferentes exosomas se diferenciaban fácilmente por A-TEEM, y un modelo PLS pudo predecir fácilmente las concentraciones de ambos componentes en muestras compuestas por los dos exosomas mezclados en proporciones conocidas.
A partir de estos resultados iniciales, se espera que A-TEEM pueda utilizarse como una herramienta rápida y rentable para la fabricación que detecte contaminantes, detecte variaciones de lote a lote y cuantifique cargas útiles.
A-TEEM para exosomas – Diferenciar y cuantificar los tipos de exosomas
Los cambios en el entorno local de disolventes de los residuos fluorescentes monitorizados por A-TEEM huellas dactilares proporcionan información sobre la agregación y la estructura secundaria de las proteínas. La insulina de acción corta y la insulina de acción prolongada tienen huellas moleculares A-TEEM únicas basadas en los diferentes entornos proteicos entre formulaciones.
Fuente: "A-TEEM ™, una nueva técnica de huella molecular de huella: transmisión simultánea de absorbancia y método de matriz de excitación-emisión de fluorescencia", publicado en Methods and Applications in Fluorescence, Volumen 6, Número 2 https://doi.org/10.1088/2050-6120/aaa818. Adquirido con Aqualog.
A-TEEM también se ha utilizado para estudiar la proporción de nanopartículas lipídicas (LNPs) intactas frente a dañadas, entregadas por diferentes dispositivos nebulizadores. Para cuantificar la integridad de los LNP durante el proceso de nebulización, se encapsuló una proteína fluorescente (calcina) en varias formulaciones de LNP. A-TEEM se utilizó para cuantificar la cantidad relativa de calceína liberada durante este proceso. Esta medición caracteriza los dispositivos más efectivos para administrar LNPs intactos a los pacientes.
Lee la publicación:
Degradación de formulaciones de administración de fármacos a base de lípidos durante la nebulización
A-TEEM pueden usarse para caracterizar componentes relevantes en matrices complejas hasta niveles sub-ppb. Esto lo convierte en un encaje natural para la caracterización de muchos productos biofarmacéuticos relevantes como vacunas, insulina, vectores virales, conjugados de fármacos anticuerpos, medios celulares, exosomas, CRISPr/CAS9 y más. Utiliza los filtros a continuación para encontrar la aplicación que mejor se adapte a tus necesidades.
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A-TEEM Espectroscopía
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