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A-TEEM 技术监测腺相关病毒(AAV)复合物
腺相关病毒(AAV)作为基因疗法及核酸疫苗载体应用广泛。随着研发需求的增长与生产规模扩大,药企对更快、更准确的分析方法提出了要求。本文探讨了 HORIBA 独有的荧光 A-TEEM™ 技术,可在 90 秒内区分与链霉亲和素-荧光探针复合与未复合的生物素化 AAV 样品,并可以进一步开发出定量分析模型以检测复合效率,在未来应用中展现潜力。
腺相关病毒(AAV)载体高效的转染能力使其成为基因治疗领域的常用工具。尽管存在免疫原性和安全性等问题,但经过不断优化,腺病毒载体在疫苗和基因治疗中的应用日益广泛,为核酸药物的递送提供了有力支持。不同血清型的 AAV 感染细胞的类型与效率存在差异,利用这种差异,AAV 能够将治疗药物递送到目标细胞。对 AAV 进行修饰以增强其对特定细胞类型的感染能力与靶向性是当下研究的重要方向,因此检测感染能力和靶向效率的工具至关重要 。检测的方法之一是利用生物素化的 AAV。生物素对链霉亲和素有很强的亲和力,为生物分子的荧光标记提供了方法,使感染能力和靶向效率得以表征。
A-TEEM 将三维荧光光谱以及紫外、可见、近红外吸光度结合,是一种快速的(几秒钟到几分钟完成数据收集)光学技术。符合 NIST 可追溯标准,并满足美国药典 USP 第<853>章和第<857>章要求。本文报告了 A-TEEM 光谱与多变量分析方法相结合,用于:1)区分生物素化的 AAV 和 AAV-链霉亲和素-探针复合物复合物,并可以实现定量建模;2)区分生物素化的AAV 和链霉亲和素-荧光探针结合物(SAF568);3)量化透析过程中 AAV 复合物溶液中游离荧光探针和未结合的链霉亲和素的去除情况。A-TEEM 光谱和多变量分析对 AAV 研究人员和药企评估 AAV 应用(包含用于QA/QC)具有重大意义,本文对此进行了讨论。
利用 A-TEEM 技术监测腺相关病毒(AAV)复合物
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