Si tienes un fluorómetro de estado estable, necesitas un EasyLife™ X con resolución temporal.

El EasyLife™ X es un sistema compacto de fluorescencia basado en filtros que es un excelente complemento para cualquier laboratorio que actualmente utilice un fluorómetro de estado estacionario pero no tenga acceso a un sistema de fluorescencia de duración permanente. A una fracción del coste de un espectrofluorómetro de mesa, el EasyLife™ X es extremadamente fácil de usar y, sin embargo, cuenta con potentes capacidades de resolución temporal y software de análisis de desintegración.

La fluorescencia resuelta en el tiempo (vidas útiles de fluorescencia) es un complemento invaluable para la fluorescencia en estado estacionario (espectros de fluorescencia)

Si actualmente usas un fluorómetro de estado estacionario para mediciones de luminiscencia, pero no tienes acceso a un sistema de vida útil de fluorescencia, deberías plantearte seriamente añadir el EasyLife™ X a tu laboratorio. Las mediciones de intensidad de fluorescencia (estado estacionario) y de vida útil de fluorescencia (resolución temporal) son complementarias. Con frecuencia se deben combinar los resultados de las mediciones de fluorescencia en estado estacionario y de las vidas vitales de fluorescencia para obtener la información más completa sobre la(s) molécula(s) de interés. Cuando se introdujeron los primeros instrumentos modernos de fluorescencia hace unos treinta años, algunos investigadores comprendían inherentemente la naturaleza complementaria de la técnica de vida útil de fluorescencia, pero francamente era irrelevante en ese momento porque el coste, tamaño y complejidad de esos primeros instrumentos desalentaban a todos, salvo a unos pocos de usar esta nueva técnica resuelta en el tiempo. Aunque el coste de la instrumentación ha disminuido considerablemente, así como el tamaño y la complejidad de la operación, antes de la introducción del nuevo EasyLife™ X, seguía siendo difícil convencer a los investigadores de invertir en un instrumento de fluorescencia para toda la vida.

A una fracción del coste de un fluorómetro de sobremesa, y porque es tan fácil de manejar como un fluorómetro, la introducción del sistema EasyLife™ X ha cambiado la actitud de la gente hacia las vidas útiles de fluorescencia como técnica. Ahora, todos los que hacen mediciones de luminiscencia pueden y deben aprovechar bien la vida útil de la fluorescencia. Al añadir fluorescencia resuelta en el tiempo a tus capacidades de investigación, finalmente podrás caracterizar completamente tu molécula fluorescente y tus sistemas moleculares. Por ejemplo, podrás averiguar cuáles son las constantes de velocidad para las emisiones de fluorescencia y para la desactivación no radiativa de tus muestras. Esta información está fácilmente disponible combinando los resultados de la vida útil con los valores cuánticos de rendimiento medidos desde el instrumento de estado estacionario.

¿Por qué la duración de la fluorescencia?
Si tienes un fluorómetro de estado estacionario, necesitas un fluorómetro de resolución temporal para diferenciar múltiples dominios estructurales y conformaciones

Si se quieren caracterizar las interacciones de una molécula con el entorno circundante, la medición en estado estacionario por sí sola puede proporcionar un espectro de fluorescencia, rendimiento cuántico de fluorescencia o valor de anisotropía, sin embargo, la mayor parte de esta información se mezcla de forma desordenada, ya que los parámetros medidos son promedios temporales y se pierde la información sobre procesos específicos. Esta información perdida se vuelve especialmente importante cuando se utilizan moléculas fluorescentes como sondas para estudiar sistemas complejos, como proteínas, ácidos nucleicos, puntos cuánticos, membranas, polímeros, tensioactivos (micelas), etc. Estos sistemas presentan frecuentemente múltiples dominios estructurales y conformaciones. La curva de decaimiento de la vida útil de la fluorescencia revelará esta información detectando múltiples vidas de fluorescencia, que no pueden obtenerse con una medición en estado estacionario donde toda esta información está totalmente oculta. El software EasyLife™ X incluso incluye un software de análisis de decaimiento extremadamente potente, incluyendo análisis de distribución ESM y MEM que se muestra aquí.

Estudiar la dinámica de conformación de proteínas

Una aplicación muy potente para un instrumento de fluorescencia resuelta en el tiempo es el estudio de múltiples estados conformacionales de una proteína. Consideremos un caso sencillo de una proteína que contiene un residuo de triptófano (Trp) (por ejemplo, albúmina sérica humana). Con un instrumento de estado estacionario, lo único que puedes medir es un espectro Trp típico que no refleja información particular sobre la proteína, salvo que contiene Trp. Sin embargo, si mides la desintegración de fluorescencia, verás que este único residuo de Trp tiene 4 vidas diferenciadas de fluorescencia. Sabes inmediatamente que la proteína existe en al menos 4 estados conformacionales diferentes, y para cada vida útil conoces el porcentaje de residuos de trp en ese estado.

Eficiencia de enlace cuantitativa

Un experimento en estado estacionario puede revelar la unión entre una sonda fluorescente y una proteína. Normalmente, la intensidad de la fluorescencia cambia como resultado de la ligación; Disminuirá o aumentará, dependiendo de la naturaleza de la sonda. La información que recibes es muy general. Has detectado si se ha producido o no el bloqueo y eso es todo. Sin embargo, con un sistema de vida útil de fluorescencia, la unión afectará a la vida útil de la sonda (por ejemplo, disminuirá o aumentará con la unión del SNA a la BSA), pero al mismo tiempo también detectas dos vidas diferentes (una para la unión y otra para la sonda no unida), así como sus contribuciones relativas (factores preexponenciales) a la desintegración general. A partir de la medición de la vida útil ahora conocemos las poblaciones relativas de sondas ligadas y no ligadas (es decir, conocemos la eficiencia de la ligación).

^{Eficiencia de enlace del 10%
Para este experimento, la eficiencia de unión es del 10%, ya que el factor preexponencial para la segunda vida útil más larga (el componente de unión) se mide en un 10%. El 90% del SNA no está vinculado}

Localizar Trp en una proteína

Una de las principales herramientas de la fluorescencia es estudiar el enfriamiento de fluoróforos añadiendo moléculas de apagación. Por ejemplo, los residuos de triptófano en una proteína pueden ser apagados por iones acrilamida o yoduro. Un experimento en estado estacionario puede mostrar la disminución de la intensidad de fluorescencia a medida que se añade el temple, y por tanto ese temple ha ocurrido, pero no puede decirte si fue un temple dinámico o estático. Sin embargo, un experimento de vida útil de fluorescencia detectará más de una vida útil debido a los diferentes sitios que Trp puede ocupar en la proteína. Además, la desintegración de fluorescencia proporcionará el efecto de extinción en cada vida, por lo que puedes obtener información sobre la localización de cada tipo de residuos de Trp (por ejemplo, si están expuestos a la superficie o enterrados dentro de la proteína).

Verifica que realmente estás midiendo el traste

La técnica de Transferencia de Energía por Resonancia de Förster (FRET) se ha convertido en una herramienta experimental muy potente y extendida para estudiar la unión molecular. Es igualmente popular a nivel celular con microscopios de fluorescencia así como en soluciones moleculares en cubetas. Sin embargo, la mayoría de los investigadores utilizan técnicas de estado estacionario para observar y cuantificar la relación entre las intensidades de fluorescencia de las longitudes de onda aceptor y donante. Esto ha llevado a varias conclusiones erróneas y a una mayor conciencia de que la técnica de resolución temporal es realmente la única forma de asegurarse de que realmente estás midiendo el FRET.

Contar con un sistema de fluorescencia resuelta en el tiempo es esencial porque el mecanismo real del apagado por fluorescencia en general no puede ser revelado por el experimento en estado estacionario. Hay dos mecanismos que conducen al temple. La primera es el apagado colisional (o dinámico), donde el fluoróforo excitado y el quencher colisionan y se difunden entre sí. La segunda es el apagado estático, donde el fluoróforo en el estado fundamental forma un complejo no fluorescente con el quencher. En ambos casos, el experimento en estado estacionario mostrará una disminución de intensidad a medida que se añade más y más enquencher. En el caso del apagado colisional (dinámico), la medición de la vida útil mostrará la disminución a medida que se añade más amortiguador. Sin embargo, en el caso del temple estático no habrá ningún cambio en la vida útil. Distinguir entre ambos mecanismos es de vital importancia cuando se estudia la transferencia de energía por resonancia de Förster (FRET). Solo la técnica resuelta en el tiempo puede demostrar que un comportamiento 'similar al FRET' no es causado por el temple estático. Solo un experimento de por vida puede descartarlo.

Mide las velocidades de difusión rotacional y determina el tamaño de las macromoléculas

La anisotropía de fluorescencia (polarización) es otro ejemplo de la importancia de la técnica de por vida. Una molécula de sonda en un tampón mostrará poca o nula anisotropía (es decir, no depende de la dirección). Si se une la sonda a una proteína, ADN, membrana u otro objetivo grande, la anisotropía de fluorescencia de la sonda aumentará. Esto es todo lo que un fluorómetro de estado estacionario puede decirte: que la sonda ahora está unida a una entidad mucho más grande. Sin embargo, si puedes medir la anisotropía de fluorescencia resuelta en el tiempo de la sonda, puedes estimar la velocidad de difusión rotacional y el tamaño real de la macromolécula a la que está unida tu sonda. Esto no puede determinarse con un fluorómetro de estado estacionario.

¡Realmente asequible y fácil de usar!

​El EasyLife™ X es la realización de un sueño de 40 años: crear un sistema de fluorescencia pequeño, sencillo y asequible para toda la vida que literalmente cualquiera pueda usar. Utilizando nuestra técnica patentada de detección de vida útil de fluorescencia y simples LED pulsados de encaje y diodos láser, el EasyLife™ X finalmente permite que cualquier investigador pueda permitirse y realmente realizar experimentos de vida útil de fluorescencia en su propio laboratorio.

¿Estás pensando en añadir la vida útil de la fluorescencia a tu fluorómetro actual?

No malgastes tu dinero en una adición cara a tu fluorómetro de envejecimiento. El EasyLife™ X ofrece todas las mismas capacidades en un instrumento nuevo y independiente de 1 pie cúbico, y te costará menos dinero. Además, tendrás la ventaja de tener tanto tu fluorómetro de estado estable como tu sistema EasyLife™ X resuelto por tiempo usados simultáneamente, aumentando drásticamente la productividad de tus laboratorios.

¿Escéptico de que un sistema tan pequeño y barato pueda hacer tanto?

No te culpamos. Es comprensible que cualquiera que haya hecho investigación de por vida con fluorescencia usando algo que no sea un EasyLife™ X pueda ser escéptico. Por eso hemos recopilado una extensa biblioteca de datos recopilados sobre el EasyLife™ X. Por favor, revisa la prueba para ver si hay muestras similares a la tuya y ver cómo podría funcionar el sistema para ti. Y si no nos crees, también puedes buscar y revisar citas de literatura usando EasyLife™.

­

Hardware

No podemos enfatizar lo suficiente lo fácil que es realizar experimentos de fluorescencia de por vida con EasyLife™. Hay un botón de encendido para encender el instrumento y una manilla para ajustar la frecuencia de agitación del microagitador opcional para la cubeta. Todo lo demás se controla a través del software. ¡Así de fácil es!

Fuentes de luz LED pulsadas

Nada podría ser más fácil. Los ingenieros de OBB han desarrollado una amplia gama de diodos emisores de luz pulsados (LED) simples, económicos y de nanosegundos para usarse como fuentes de excitación con los sistemas EasyLife™. Estas fuentes de luz pequeñas pero robustas están disponibles en una amplia gama de longitudes de onda, desde UV hasta NIR. Tienen una excelente relación pulso a pulso y estabilidad a largo plazo tanto en su intensidad como en sus perfiles temporales, como lo demuestra la alta calidad de los datos que produce el sistema. Cambiar de un LED a otro no requiere alineación y solo lleva unos segundos. No podrías trabajar con una fuente de luz más sencilla, sin mantenimiento y para la investigación de la vida útil de la fluorescencia.

Ventajas de los LED pulsados

Los LEDs pulsados EasyLife™ tienen ciertas ventajas claras frente a fuentes de luz más convencionales, como lámparas de flash de nanosegundos, láseres y diodos láser. Estas ventajas son:

• Económico
• Duradero
• No requieren mantenimiento
• Fuentes de pulsos muy estables
• Rápido
• Longitudes de onda de UV a NIR (actualmente 280–670 nm)
• Tamaño pequeño
• Fácilmente intercambiables (encajer—silir)

Impresionante estabilidad de pulsos

LEDs disponibles

Lo que tienes que hacer es seleccionar una fuente o fuentes. La siguiente lista muestra las opciones actuales. Intercambiar fuentes es muy fácil, solo tienes que despegar y luego acoplar y listo—no hace falta alineación.

Por debajo de 280 nm estamos limitados por el estado actual de la tecnología para LEDs. No desesperes, el futuro debería ofrecer aún más opciones

Compartimento de muestras

El compartimento de muestras de EasyLife™ puede configurarse con una variedad de opciones, incluyendo las siguientes.

• Microagitador
• Filtros paso banda y paso largo
• Filtros de densidad neutra
• dewar dedo frío

Detección única patentada

El EasyLife™ X es un sistema de duración de la vida útil de fluorescencia en el dominio del tiempo. Recoge una curva de decaimiento, permitiendo al usuario ajustar la curva con un software de análisis completo que proporciona muchas herramientas estadísticas para evaluar la calidad del ajuste. La técnica particular de detección en el dominio del tiempo utilizada en el EasyLife™ X se llama técnica estroboscópica y está patentada y es única. La técnica estroboscópica se desarrolló inicialmente como una alternativa más sencilla y menos costosa al conteo de fotones únicos correlacionado en el tiempo (TCSPC). Por ello, el EasyLife™ X es el sistema de fluorescencia de vida útil más económico del mundo.

Protocolo de Adquisición de Cinética de Reacción Basada en la Vida Útil

Además de adquirir decaimientos de fluorescencia, el EasyLife™ X tiene la capacidad de medir la cinética de reacción basada en la vida útil. Si estás familiarizado con el uso de un fluorómetro para la cinética basada en el tiempo, sí que estás familiarizado con la recogida de la intensidad en estado estacionario en función del tiempo para monitorizar la cinética y las reacciones. El EasyLife™ X puede adquirir datos de manera similar, excepto que, en lugar de que la intensidad cambie con el tiempo, el EasyLife™ X adquiere y grafica en tiempo real la vida útil medida en función del tiempo. Este protocolo de adquisición permite medir cambios en la vida útil en lugar de la intensidad. La duración de esta medición puede ser de unos pocos segundos a muchas horas. Creemos que esta capacidad se convertirá en una herramienta esencial para una amplia variedad de aplicaciones emergentes.

*Si tu cinética ocurre en un periodo de tiempo más corto, considera nuestro nuevo sistema de DeltaPro que puede medir vidas útiles en tan solo 1 milisegundo.

Adquisición única de decaimiento en escala temporal logarítmica/aritmética

El software EasyLife™ X aprovecha al máximo el hardware patentado de detección estroboscópica para ofrecer otro protocolo de adquisición único. Recopilar datos en una escala temporal logarítmica o aritmética puede ser extremadamente útil para muestras que tienen vidas de fluorescencia muy cortas y muy largas. Para los componentes de corta duración necesitas recopilar muchos puntos de datos para conseguir un buen ajuste para esas vidas, pero para las vidas muy largas no quieres recopilar datos con resolución simultánea porque tarda mucho más y no aporta ningún beneficio para ajustar la curva de decaimiento.

Los sistemas que utilizan otras técnicas como TCSPC recogen datos en una escala temporal lineal, por lo que para esta muestra necesariamente deben recopilar muchos más puntos de datos a lo largo de toda la ventana temporal de adquisición para tener suficientes puntos de datos que resuelvan los componentes de corta vida útil. De este modo, la técnica estroboscópica empleada con el EasyLife™ X puede recopilar fácilmente datos excelentes para fenómenos complejos de decaimiento.

Sistema EasyLife™ X

¡Todo el EasyLife™ X ocupa solo un pie cúbico de espacio en el laboratorio!

Con nuestras fuentes de luz LED propietarias combinadas con nuestro sistema patentado de detección estroboscópica, puedes aprovechar los beneficios de una alta sensibilidad, excelente resolución temporal y la capacidad única de adquirir cinética a lo largo de la vida o de utilizar tanto la base de tiempo de adquisición lineal como no lineal (aritmética y logarítmica). El resultado es un instrumento potente y versátil de por vida, capaz de manejar complejos desintegramientos multiexponenciales con un amplio rango subyacente de vidas útiles.

¿Hemos mencionado que el EasyLife™ X es el sistema más fácil disponible para realizar experimentos de por vida útil con fluorescencia?

Software

El software EasyLife™ es tan fácil de usar que literalmente cualquiera puede usar el sistema. Un requisito fundamental para que un sistema de fluorescencia sea fácil de usar es el software, y el software EasyLife™ cumple con el trabajo. Así de sencillo es usar el software.

Solo dos pasos

1. Selecciona tu adquisición de Decaimiento de Fluorescencia. Pulsa el botón Adquirir y en segundos o minutos, dependiendo de tus ajustes, habrás recogido una curva de decaimiento. Repite la adquisición para obtener una muestra de dispersión y así adquirir una función de respuesta del instrumento si es necesario.

2. Analizar la desintegración: De la lista desplegable de Math pull, selecciona el modelo de decaimiento que deseas emplear para ajustarse a la curva de desintegración. Estira la ventana de análisis a lo largo de la curva de decaimiento para determinar el rango del ajuste. En Parámetros de Inicio, comprueba el número de componentes que quieres encajar. Luego pulsa el botón Start Fit. El software EasyLife™ muestra automáticamente la curva de decaimiento ajustado resultante, los tiempos de vida medidos y varios parámetros de bonidad del ajuste como el CH1 al cuadrado, el gráfico de los residuos y más. No hay nada más fácil que eso.

El software EasyLife™ es tan potente que te sorprenderá lo mucho que obtienes con tu sistema

No te dejes engañar por el precio de EasyLife™. Este sistema incluye un conjunto totalmente completo de herramientas de adquisición y análisis para fluorescencia resuelta en el tiempo.

Protocolo de Adquisición de Cinética de Reacción Basada en la Vida Útil

Además de adquirir decaimientos de fluorescencia, el EasyLife™ X tiene la capacidad de medir la cinética de reacción basada en la vida útil. Si estás familiarizado con el uso de un fluorómetro para la cinética basada en el tiempo, sí que estás familiarizado con la recogida de la intensidad en estado estacionario en función del tiempo para monitorizar la cinética y las reacciones. El EasyLife™ X puede adquirir datos de manera similar, excepto que, en lugar de que la intensidad cambie con el tiempo, el EasyLife™ X adquiere y grafica en tiempo real la vida útil medida en función del tiempo. Este protocolo de adquisición permite medir cambios en la vida útil en lugar de la intensidad. La duración de esta medición puede ser de unos pocos segundos a muchas horas. Creemos que esta capacidad se convertirá en una herramienta esencial para una amplia variedad de aplicaciones emergentes.

*Si tu cinética ocurre en un periodo de tiempo más corto, considera nuestro nuevo sistema de DeltaPro que puede medir vidas útiles en tan solo 1 milisegundo.

Adquisición única de decaimiento en escala temporal logarítmica/aritmética

El software EasyLife™ X aprovecha al máximo el hardware patentado de detección estroboscópica para ofrecer otro protocolo de adquisición único. Recopilar datos en una escala temporal logarítmica o aritmética puede ser extremadamente útil para muestras que tienen vidas de fluorescencia muy cortas y muy largas. Para los componentes de corta duración necesitas recopilar muchos puntos de datos para conseguir un buen ajuste para esas vidas, pero para las vidas muy largas no quieres recopilar datos con resolución simultánea porque tarda mucho más y no aporta ningún beneficio para ajustar la curva de decaimiento.

Software de Análisis de Decays de Clase Mundial

EasyLife™ X viene con un potente paquete de análisis de por vida que incluye 8 programas de ajuste diferentes y una calculadora de trastes, cubriendo prácticamente todos los posibles escenarios de aplicación. El software incluso incluye análisis de distribución para análisis complejos de decaimiento multicomponente. Todos los programas de ajuste emplean la deconvolución como opción estándar. La deconvolución elimina la distorsión impuesta a una curva de decaimiento por un ancho temporal finito del pulso de excitación. Permite determinar vidas útiles 10 veces más cortas que el pulso de excitación. Para utilizar la opción de deconvolución, el usuario debe adquirir una función de respuesta del instrumento (IRF) además de la desintegración de fluorescencia. El IRF puede medirse reemplazando la muestra fluorescente por un dispersor.

Análisis de distribución de la desintegración multiexponencial

^{La desintegración de fluorescencia de los puntos cuánticos CdSe medidos con el EasyLife™ X indica una naturaleza altamente heterogénea de la muestra. Dado que esta muestra tenía desintegraciones multiexponenciales con un amplio rango subyacente de vidas útiles, se utilizó la adquisición única en escala temporal de progresión aritmética con esta muestra para mejorar considerablemente el tiempo de adquisición y el análisis. Este resultado fue validado por la herramienta ESM de análisis de distribución por vida útil, que no solo confirmó los valores de vida útil del análisis discreto de 4 exponencias, sino que proporciona información valiosa sobre la distribución de esas vidas discretas}

Los siguientes programas de análisis están incluidos en cada EasyLife™ X

Exponenciales de 1 a 4

Este programa es adecuado para el análisis de desintegraciones de fluorescencia que consisten en hasta 4 exponenciales y factores preexponenciales asociados. Este es el programa más utilizado en el análisis a lo largo de la vida.

Multi exponenciales de 1 a 4

El método de vida útil exponencial de múltiples archivos de 1 a 4 permite el análisis de múltiples pares dispersor/muestra como una operación por lotes. Cada par se analizará por separado en el mismo rango con el mismo número de exponenciales y las mismas opciones. Este tipo de análisis es útil cuando se ha recopilado una serie de curvas de decaimiento en función de algún parámetro (es decir, la concentración del reactivo añadido). Las tendencias en los valores de los parámetros de vida útil pueden entonces reconocerse con relativa facilidad.

Exponenciales globales de 1 a 4

Este programa analiza decaimientos con hasta 4 vidas útiles para varios archivos de datos simultáneamente. El análisis global asume que las vidas son las mismas entre los archivos de datos, pero que las preexponenciales asociadas pueden variar libremente. Por ejemplo, el global puede ser útil para analizar diversas mezclas de hasta 4 fluoróforos.

Desintegración de anisotropía

Este programa se utiliza para calcular tiempos de correlación rotacional más un término residual de anisotropía. Se requieren polarizadores opcionales. El programa permite primero al usuario calcular la(s) vida(s) de fluorescencia a partir de las intensidades de emisión polarizadas paralelamente y perpendicularmente. El usuario puede entonces calcular el(los) tiempo(s) de correlación rotacional.

Cinética de micele

Este programa utiliza una función de ajuste "exponencial estirado" (ecuación de Infelta-Graetzel), que describe el apagado en las micelas cuando las moléculas de extinción añadidas se distribuyen en Poisson entre las micelas. El análisis permite determinar el número de agregación micelar y la constante de la tasa de temple.

Distribución de por vida de MEM

El Método de Máxima Entropía (MEM) está diseñado para recuperar distribuciones a lo largo de la vida sin suposiciones a priori sobre sus formas. Este método utiliza una serie de exponenciales (hasta 200 términos) como función de sonda con vidas fijas, logarítmicamente espaciadas, y variables preexponenciales. Esto permite analizar desintegraciones de fluorescencia con vidas subyacentes que abarcan varios órdenes de magnitud. En muchas situaciones, el MEM es capaz de diferenciar entre distribuciones continuas y decaimientos discretos y multiexponenciales. El algoritmo minimiza el qui-cuadrado mientras maximiza la función de entropía en cada paso de iteración. Ideal para desintegraciones complejas, como proteínas y membranas marcadas, sondas adsorbidas en superficies, sondas con flexibilidad conformacional, polímeros, etc.

Distribución de por vida ESM

Similar a la MEM, pero sin maximización de entropía, el Método de la Serie Exponencial (ESM) está diseñado para recuperar distribuciones de vida sin supuestos a priori sobre sus formas. Este método utiliza una serie de exponenciales (hasta 200 términos) como función de sonda con vidas fijas, logarítmicamente espaciadas, y variables preexponenciales. Esto permite analizar desintegraciones de fluorescencia con vidas subyacentes que abarcan varios órdenes de magnitud. En muchas situaciones, la ESM es capaz de diferenciar entre distribuciones continuas y decaimientos discretos y multiexponenciales. Ideal para desintegraciones complejas, como proteínas y membranas marcadas, sondas adsorbidas en superficies, sondas con flexibilidad conformacional, polímeros, etc.

No exponencial

Este programa permite el análisis de datos mediante una función de ajuste que consiste en dos exponenciales multiplicadas juntas y cada una con exponentes variables del tiempo. Los exponentes pueden variar o ser fijos, lo que proporciona una función general potente para modelos como la transferencia de energía de Förster, el temple dependiente del tiempo y la interacción molecular en geometrías restringidas (por ejemplo, moléculas en superficies, zeolitas, etc.).

Calculadora de FRET

La Transferencia de Energía por Resonancia de Forster (FRET), a veces denominada Transferencia de Energía por Resonancia de Fluorescencia, es una técnica extremadamente potente para el estudio de las interacciones moleculares. Las vidas útiles de fluorescencia se han convertido en la técnica preferida para realizar experimentos de FRET porque los investigadores han llegado a la conclusión de que los experimentos de FRET basados en mediciones de fluorescencia en estado estacionario a veces pueden dar resultados erróneos debido a desplazamientos espectrales que resultan en algo distinto al FRET real. La técnica de la fluorescencia a la duración te indica si lo que estás viendo es realmente un traste. La calculadora de FRET EasyLife™ calcula parámetros básicos de FRET, como la eficiencia del FRET, la constante de tasa de FRET, la distancia D-A y el radio de Forster Ro (requiere datos espectrales de un fluorómetro).

Trace Math

Los comandos en el menú de Traza Math permiten realizar funciones y operaciones matemáticas específicas sobre trazas individuales o regiones seleccionadas de una traza. Hay 16 funciones, incluyendo antilog, promedio, promedio de distribución, combinación, combinación xy, derivadas múltiples, integración, ajuste lineal, escalado lineal, logaritmo, normalización, recíproco, suavizado, truncamiento, supresión de línea base y fusión de trazas. También hay un localizador de picos proporcionado. Todas estas funciones pueden facilitar enormemente el procesamiento y la presentación de datos.

DVD EasyLife™ QuickStart

El software EasyLife™ que viene con el sistema puede cargarse en tu portátil o ordenador con Windows XP®. Se carga fácilmente en el ordenador y se autocalibra con el instrumento. Con el DVD QuickStart podrás empezar a obtener datos de inmediato. Sin embargo, la compatibilidad del software EasyLife™ con los ordenadores suministrados por el cliente no es responsabilidad de OBB Corp. Si te preocupa proporcionar tu propio portátil o ordenador compatible, podemos incluir un portátil (con el software EasyLife™ preinstalado) en tu presupuesto de EasyLife™ para que venga con tu sistema. Si decides proporcionar tu ordenador directo, a continuación tienes los requisitos mínimos de especificación.

Requisitos del Computador

• Microsoft Windows XP® con SP2
• Procesador Intel Pentium® de clase III, 500 MHz o superior
• Puerto USB (recomendado USB 2)
• Pantalla de vídeo 800 x 600, 256 colores o más
• Mínimo de 256 MB de RAM (se recomienda 512 MB o más)
• Mínimo de 125 MB de espacio libre en disco duro
• Ratón compatible con Microsoft®

Datos

La única forma de demostrar que un sistema es tan bueno como dices es mostrar los datos reales

Cuando desarrollamos el EasyLife™, sabíamos que algunas personas serían escépticas de que un instrumento tan barato, tan pequeño y tan fácil de manejar pudiera funcionar para ellos. Por eso hemos recopilado una colección creciente de datos adquiridos sobre EasyLife™. Por favor, revisa los enlaces de abajo para ver muestras o experimentos similares a los tuyos y comprueba por ti mismo lo bien que puede funcionar el sistema para ti.

Aplicaciones para el EasyLife™

Proteínas

La mayoría de las proteínas fluorescan debido a la presencia de uno o los tres aminoácidos fluorescentes: triptófano, tirosina y fenilalanina. La fluorescencia intrínseca y temporal resuelta del triptófano se utiliza comúnmente para estudiar la estructura y dinámica de las proteínas. Estos experimentos requieren fuentes de luz pulsada emitidas en el ultravioleta, entre 270 y 295 nm. El EasyLife™ X, equipado con la fuente LED pulsada de 280 o 295 nm, es un instrumento muy robusto pero rápido, perfectamente adecuado para su uso con fluoróforos triptófano y tirosina.

Si usas fluoróforos externos, hay una amplia selección de LEDs pulsados disponibles para cualquier longitud de onda del rango UV-VIS. Una sonda hidrofóbica sensible a la polaridad como el ANS es un buen ejemplo de la unión de una sonda extrínseca a una proteína.

^{La unión del SNA a la albúmina sérica bovina se monitorizó con el EasyLife™ X equipado con el LED de 370 nm. La vida útil del ANS en el buffer es muy corta, 325 ps, y aumenta a 8 ns al unirse a la BSA. La proporción de SNA libre respecto al SNA unido a BSA (9:1) puede determinarse fácilmente a partir del ajuste doble exponencial a la desintegración de fluorescencia.}

^{Las desintegraciones de fluorescencia de la albúmina sérica bovina (BSA) en el tampón PBS se midieron con el EasyLife™ X. La proteína nativa muestra una desintegración casi exponencial con una vida media de 6,31 ns. Tras ser tratado con detergente SDS, el BSA experimenta una transición estructural y su desintegración de fluorescencia presenta dos vidas útiles más cortas, 1,47 ns (37%) y 4,43 ns (63%).}

ADN (ácido nucleico)

Si estudias características conformacionales o hibridación de ADN, el EasyLife™ X es el sistema adecuado para ti. Una molécula de sonda en un tampón mostrará muy poca o ninguna anisotropía. Sin embargo, si la adhieres a una proteína, ADN o membrana, la anisotropía aumenta. Esto es todo lo que el experimento de estado estacionario puede decirte: la sonda está unida a una entidad mucho mayor. Sin embargo, si mides la vida útil de la sonda, puedes estimar la velocidad de difusión rotacional además del tamaño de la macromolécula que está unida a la sonda.

^{El bromuro de etidio (EB) es una sonda de ADN comúnmente utilizada, que se intercala fácilmente entre las bases del ADN. El EB es débilmente fluorescente en medios acuosos, pero se vuelve fuertemente fluorescente tras la intercalación en el ADN. La vida útil de la EB en tampón es de 1,71 ns y aumenta drásticamente hasta 22,7 ns tras unirse al ADN del timo de ternero.}

^{Desintegración de fluorescencia de PicoGreen/ADN medida con un sistema de vida útil EasyLife™ X. La diversidad conformacional puede dar lugar a múltiples vidas útiles de la sonda unidas al ADN. El EasyLife™ X es totalmente capaz de medir y analizar desintegraciones tan complejas. La desintegración de PicoGreen, una sonda común para el ADN de doble cadena, muestra un comportamiento claramente multiexponencial, resultando en tres vidas que oscilan entre 220 ps y 9,7 ns.}

Puntos Cuánticos

La desintegración de fluorescencia de los puntos cuánticos CdSe medidos con el EasyLife™ X indica una naturaleza altamente heterogénea de la muestra. Una característica única de EasyLife™ X, la capacidad de adquirir datos utilizando escalas temporales de progresión logarítmica o aritmética, facilita enormemente el análisis de desintegraciones multiexponenciales con un amplio rango subyacente de tiempos de vida. Aquí, se necesitaba una función de decaimiento 4-exponencial para describir adecuadamente la desintegración experimental, adquirida con la escala temporal aritmética. Este resultado fue validado por el análisis de distribución por vida útil ESM, otra potente herramienta analítica en el software EasyLife™ X, que confirmó los valores de vida útil del análisis discreto 4-exponencial.

Estudio de bajas temperaturas

^{Desintegraciones de fluorescencia de la muestra 5 en MTHF a 295 K y 77 K medidas con el sistema de vida útil EasyLife™ X equipado con el acoplamiento dewar de nitrógeno líquido. Las vidas recuperadas son 4,4 ns (295 K) y 7,2 ns (77 K).}

Complejos metal-ligando (MLC)

Los complejos metal-ligando (MLC) se han vuelto sondas muy populares debido a su vida útil relativamente larga. Son especialmente adecuados para estudiar grandes sistemas macromoleculares como ácidos nucleicos y proteínas. La figura muestra una desintegración de uno de los tipos más comunes de MLC, tris (2,2'-bipyridyl) rutenio (II). La sonda tiene un rendimiento cuántico bastante bajo (alrededor del 4%). ¡No hay problema para el EasyLife™ X! La vida útil recuperada es de 429 ns.

Chl A extraída de hojas de espinaca

^{Desintegración por fluorescencia de Chl A extraída de hojas de espinacas y suspendida en tampón. La desintegración es doblemente exponencial debido a la presencia de agregados de Chl A. Las vidas recuperadas son de 570 ps (93%) y 4,2 ns (7%).}

Desintegración de fluorescencia de m-TPP

^{Desintegración por fluorescencia de meso-tetrafenilporfirina (m-TPP) en cloroformo medida con el EasyLife™ X equipado con una fuente LED de 370 nm. Equipado con una única función exponencial, la vida útil recuperada es de 9,16 ns. El valor chi-cuadrado de 1,07 y la función residual aleatoria indican que el modelo exponencial único describe adecuadamente la desintegración de m-TPP.}

Desintegración de fluorescencia de Rose Bengal

^{Desintegración de fluorescencia de Rose Bengal en agua medida con el sistema de vida útil EasyLife™ X equipado con una fuente de luz LED de 525 nm. Gracias a su pulso altamente reproducible y a una electrónica de detección muy estable, el EasyLife™ X es capaz de medir vidas útiles, que son más de un orden de magnitud más cortas que el ancho de pulso del LED. La vida útil se determina mediante la reconvolución iterativa de la función de respuesta del instrumento (IRF) y la verdadera decaimiento exponencial combinada con la minimización de mínimos cuadrados. La vida recuperada de 94 ps coincide perfectamente con los datos de la literatura que indican una vida útil de 92 ps para la Rose Bengal en agua.}

Fluidez de membrana

Una de las aplicaciones biológicas clásicas de la espectroscopía de fluorescencia resuelta en el tiempo. Normalmente, se utiliza una molécula hidrofóbica alargada (es decir, insoluble en agua) como sonda (por ejemplo, DPH) y se mide la desintegración de anisotropía. Debido a la topología de la membrana, las rotaciones de la sonda están limitadas al espacio dentro de un cono. El tiempo de correlación rotacional y el ángulo del cono se obtienen a partir de los datos de anisotropía.

Estado Excitado

Un área de investigación muy básica, donde una molécula fluorescente es un objeto de investigación por sí sola y no un medio para estudiar otra cosa. Se miden las vidas útiles de la fluorescencia para obtener información sobre la naturaleza de la transición electrónica, determinar constantes de velocidad radiativa y no radiativa, seguir procesos de relajación en estado excitado, cambios intrínsecos en la geometría molecular, transferencia de electrones y energía, interacciones con disolventes, etc.

Tensioactivos (micelas)

Las micelas son agregados moleculares que se forman cuando los jabones y detergentes se disuelven en agua. Las desintegraciones de fluorescencia se utilizan principalmente para determinar el número de agregación de micelas, la concentración crítica de micelas, la polidispersión (distribución de tamaños de micelas) y las tasas de difusión en las micelas.

Polímeros

La fluorescencia con resolución temporal se utiliza para estudiar la dinámica de cadenas intramoleculares, las distancias de extremo a extremo, la estructura secundaria, la viscosidad y la asociación de polímeros. Las técnicas habituales son: FRET, desintegración de anisotropía, formación de excímeros o excíplexos y duraciones de vida.

Ciclodextrinas (nanocavaties)

Las ciclodextrinas (CDs) son moléculas cíclicas de azúcar que poseen cavidades internas capaces de complejor moléculas orgánicas y organometálicas hidrofóbicas en solución acuosa. Los CDs tienen forma de conos truncados con tres diámetros de cavidad diferentes: 6,5 A (α-CD), 7,5 A (β-CD) y 9,0 A (γ-CD). Como los CDs son solubles en agua, pero tienen un interior hidrofóbico, pueden usarse para administrar fármacos hidrofóbicos. Las interacciones e inclusión de fármacos, esteroides y otras moléculas con los CDs han sido ampliamente estudiadas con fluorescencia resuelta en el tiempo. Los CDs también se utilizan para estudiar los efectos de las geometrías restringidas en la fotoquímica y el comportamiento dinámico de las moléculas invitadas.

Transferencia de carga intramolecular en estado excitado (TIC)

Muchas moléculas presentan un grado considerable de redistribución de carga al excitarse. Algunos incluso pueden sufrir una separación completa de carga en la que un electrón salta de un extremo a otro de la molécula. En muchos casos, los cambios en la geometría molecular acompañan a la transferencia electrónica (por ejemplo, TICT: estados de transferencia de carga intramolecular retorcidos). Estas moléculas se utilizan a menudo como sondas fluorescentes, ya que los estados excitados altamente polares las hacen muy sensibles al entorno. El fenómeno TIC también ocurre de forma natural, por ejemplo, como uno de los procesos principales en la fotosíntesis. La vida útil de la fluorescencia es una herramienta común para estudiar las TIC; Da directamente la constante de velocidad para la transferencia de carga. La cinética de desintegración de fluorescencia, combinada con espectros de fluorescencia resuelta en el tiempo, podría esclarecer el mecanismo cinético que conduce al estado TIC, así como el mecanismo de relajación posterior.

Porfirinas y clorofilas

Las porfirinas y las clorofilas, compuestos de gran importancia biológica, emiten fluorescencia que requiere sensibilidad NIR. No es un problema para el EasyLife™ X, cuando está equipado con el detector opcional mejorado en rojo. Las caries tanto de porfirinas como de clorofilas pueden medirse fácilmente bajo diversas condiciones. Esto convierte a EasyLife™ X en una herramienta valiosa para investigadores que estudian procesos primarios en la fotosíntesis y para la validación de propiedades fotoquímicas y fotofísicas de fotosensibilizadores basados en porfirina para la terapia fotodinámica.