大多数分子在室温下处于稳定的最低能态,称为基态。许多分子在被激发前处于最低振动能级。
当分子吸收一定波长的光时,被吸收的光子使分子处于更高的振动能级。然后分子与其他分子碰撞,使其失去振动能量并返回到激发态的最低振动能级。之后分子可以回到基态的振动能级。
当分子回到基态时,它会发射一个光子,其波长不同于激发它的波长。此时分子将显示荧光。(参见雅布朗斯基图)
荧光可以用荧光光谱仪测量。荧光光谱仪是一种设计用于测量荧光各种参数的仪器,包括激发后发射的强度和波长分布。化学家用它来识别样品中特定分子的性质和数量。
化学家将能够显示荧光的分子称为荧光团。
科学家使用荧光光谱仪来激发荧光团分子并测量其发射的荧光。荧光光谱仪的激发源使用紫外线或可见光激发,如激光、氙灯或发光二极管。激发光通过单色仪选择特定波长,单色仪通常使用衍射光栅进行分光及波长选择。衍射光栅是一块玻璃或金属板,上面刻有非常接近的平行线,通过光的衍射和干涉进行分光。射出光的角度与其波长相关。
荧光光谱仪将具有单色波长的光聚焦到样品上。样品发出某种波长的光,并传播到检测器。检测器通常与光源成 90 度角,以最大程度避免透射激发光的干扰。
光源发出的光子传播到光检测器。与检测器相连的计算机软件生成光谱,显示样品吸收哪些波长。
发射光谱显示样品发射了哪些波长的光。
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